利用绿色荧光蛋白报告基因标记研究麦根腐平脐孺孢对小麦根和叶片的侵染.pdfVIP

中国农业科学 2012,45(17):3506-3514 Scientia Agricultura Sinica doi: 10.3864/j.issn.0578-1752.2012.17.006 利用绿色荧光蛋白报告基因标记研究麦根腐平脐孺孢 对小麦根和叶片的侵染 1,2 2 3 1 2 闫立敏 ，王晓鸣 ，徐荣旗 ，东方阳 ，李洪杰 1 2 （河北科技师范学院生命科技学院，河北秦皇岛066004 ； 中国农业科学院作物科学研究所/农作物基因资源与基因改良国家重大科学工程，北京 3 100081； 中国农业科学院生物技术研究所，北京 100081 ） 摘要：【目的】利用绿色荧光蛋白标记研究麦根腐平脐孺孢（ Bipolaris sorokiniana ，引起小麦根腐病和叶 枯病）对小麦根系和叶片的侵染过程，建立直观、非破坏性研究病原菌—植物互作的体系。【方法】采用农杆菌介 导法将 gfp 导入麦根腐平脐孺孢菌株Bs-1 中，对转化子进行荧光表达、PCR验证、遗传稳定性、生长特性和胞外 酶代谢分析。选用与野生型菌株表现相近的转化子 Bs-GFP 研究麦根腐平脐孺孢对小麦品种矮抗 58 根和叶片的侵 染过程。【结果】转化子 Bs-GFP 的菌丝和分生孢子表达明亮的绿色荧光，利用基因特异标记扩增证明gfp 被整合 到真菌的基因组中。对GFP 标记菌株Bs-GFP的遗传稳定性和生长特性分析表明，gfp 在转化子中能稳定地遗传， 菌落的生长速度和胞外酶代谢与野生型菌株相比没有显著差异。菌株Bs-GFP可以在小麦的地下和地上部分引起病 症，而且与野生型菌株 Bs-1 在小麦植株根系和茎基部组织定殖的数量（即 CFU 值）相近。【结论】利用农杆菌介 导方法获得表达绿色荧光的麦根腐平脐孺孢菌株可以直观地观察病原菌对寄主的侵染过程，研究结果有助于更好 地解析麦根腐平脐孺孢与小麦以及其它禾谷类寄主之间的互作。 关键词：农杆菌；麦根腐平脐孺孢；GFP；遗传转化 Root and Leaf Infection as Revealed by Autofluorescent Reporter Protein GFP Labeled Bipolaris sorokiniana in Wheat 1,2 2 3 1 2 YAN Li-min , WANG Xiao-ming , XU Rong-qi , DONGFANG Yang , LI Hong-jie 1 2 ( College of Life Science and Technology, Hebei Normal University of Science Technology, Qinhuangdao 066004, Hebei; Institute of Crop Science, Chinese Academy of Agricultural Sciences/Nationa