γ-聚谷氨酸提取工艺的探索.pdfVIP

J■■_o、 《鳓鳃五飚驻吻萨盟缎褫珊池懋 Y一聚谷氨酸提取工艺的探索· 施庆珊“2郑国爱2林万全2冯劲1黄小茉。2欧阳友生Ⅵ陈仪本1一 (1．广东省微生物研究所广东省菌种保藏与应用重点实验室广东省微生物应用新技术公开实验室广东省华南 应用微生物重点实验室——省部共建国家重点实验室培育基地广州510070；2．广东迪美生物技术有限公司 广州5100663) 摘要：为了降低y一聚谷氨酸提取过程酒精的消耗量，提高产物提取得率和产品纯度，本研究分别考察了采用硅藻 土、活性炭、大孔树脂对Y一聚谷氨酸产物纯度和提取率的影响。试验结果表明同时用硅藻土1．5％、活性炭0．蹦、 大孔树脂10％进行处理，可得到纯度更高的产品。发酵液调pH7．2后，加两倍体积95％7,醇，搅拌、静置0．5h，弃上 清，留沉淀，加入纯水至等重量溶解，调pH至3一，加入1．5％硅藻土、0．揣活性炭脱色，处理0．5h-。滤纸过滤，过 阳离子大孔交换树脂，过0．45u／0．22u滤膜除菌，透析去除小分子物质，聚7．--醇浓缩，真空冷冻干燥，Y-PGA的 纯度(以H型计)在90％以上。 关键词：Y一聚谷氨酸；提取；硅藻土；活性炭；大孔树脂 Y一聚谷氨酸(polyY—glutamicacid，Y-PGA)是由L一谷氨酸和D一谷氨酸通过酰胺键结合形 成的一种多肽分子，具有增稠、乳化、成膜、保湿、絮凝、粘合、无毒、水溶、生物可降解等性能， 适用于食品、化妆品、生物医学、环境保护等领域n1。特别是近年来随着对Y一聚谷氨酸的深入研究， Y一聚谷氨酸作为一种高分子生物制品，愈来愈显现出广阔的研究价值和应用前景。 发酵液 I I 2QQQQ￡Z婴离!坠!§盆鲑。 ’ ’ 上清液 细胞 I l加入4倍体积的甲醇或乙醇，20000r／m离心15分钟，去沉淀物，真空干燥 ★ Y—PGA粗产品 I 上溶解在100—200倍(w／V)d的蒸溜水中，25000r／m离心15分钟 上清液 I l用IE—Labo(一种脱盐仪器，Toschc0．生产)电透析，脱盐30分钟至5小时，真空干燥 + Y-PGA纯品 图1．Y-PGA的分离纯化工艺 Y—PGA的微生物合成一般通过大量培养、收集菌体，然后进行提取分离。Y—PGA的分离纯化一 般采用有机溶剂(甲醇或乙醇)沉淀后，通过离心、干燥得到纯品，一般步骤如图l所示嘲，细胞 通过离心从发酵液中分离出来，后通过冷冻干燥，测定干细胞的重量，包含Y-PGA的上清液加入4 倍体积的甲醇，放置过夜，沉淀物通过离心收集，通过冻干得到粗产品。粗产品溶解在0．5-1％(w／v) ‘攻关项目：广东省科技计划项目(2009A010700005)资助。 E-mail：jigan@gdim．cn。 “ h￡ J会议文集lPFir)：EEo J●■_o’、 鳍五魔盎吻萨她越窳珊封镶《鳓 公司出品的一种脱盐仪进行脱盐)和冷冻干燥得到纯的Y_PGA‘2’。目前，Y—PGA的分离纯化主 要存在几个难题n1：一是发酵液黏度高，菌液分离困难；二是发酵液成分复杂，提取纯化成本高； 三是大量使用乙醇等存在环保、生产安全等隐患：四是提取的产物普遍纯度不高。 l材料与方法 1．1试验材料 GIM-PIO，由本实验室从豆制品中分离所得，具有产 发酵用菌株：地衣芽孢杆菌晟lleheMformis Y一聚谷氨酸特性。