环境水样中微囊藻毒素前处理技术及色谱检测方法研究进展.pdfVIP

环境水样中微囊藻毒素前处理技术及色谱检测方法研究进展 芮翠杰，马继平* (1 青岛理工大学环境与市政工程学院，山东省青岛市，266033 ，E-mail 地址： majiping2001@) 摘要：蓝藻爆发产生的微囊藻毒素（Microcystins, MCs ）具有致癌作用，对生物存在潜在的危害。它们在环境 水体中的含量较低，一般为 ng/L-ug/L 水平。因此，建立一种可靠、快速和灵敏的检测 MCs 的方法十分必要。 该文重点介绍了目前常用的测定环境水样中微囊藻毒素的样品前处理方法，包括固相萃取(SPE)、固相微萃取 (SPME)、免疫亲和色谱(IAC)和浊点萃取(CPE)等，并总结了 MCs 主要的色谱检测方法。 关键词：微囊藻毒素；前处理技术；色谱；环境水样；综述 1 引言 近年来水体污染逐渐加重，由富营养化而导致的蓝藻水华日趋普遍，藻细胞破裂会释放 出多种毒素，其中微囊藻毒素（Microcystins, MCs ）是出现频率最高、产生量最大和造成危害 最严重的藻毒素种类[1] ，因此微囊藻毒素污染己成为一个全球关注的环境问题。MCs 是一类具 有生物活性的单环七肽，相对分子量约为 1000，基本结构为环（D-丙氨酸-L-X-D-赤- 甲基-β-D- 异天冬氨酸-L-Z-Adda-D-异谷氨酸-N- 甲基脱氢丙氨酸)[2] 。目前已鉴定的MCs 异构体已超过 70 多种，其中最常见的有 MC-LR 和 MC-RR ，L 、R 分别代表亮氨酸和精氨酸。由于环状结构和 共轭双键的存在，MCs 性质较为稳定，抗 pH 变化；具有热稳定性，加热煮沸后不失活，不挥 发，能耐 300°C 的高温；易溶于水、甲醇或丙酮，不溶于非极性溶剂；具有生物富集性。MCs 是一种肝毒素，能够造成野生动物、家畜、家禽等的中毒死亡，还会引发人类肝损伤和肝癌 的高发[3] 。世界卫生组织(WHO)及我国《生活饮用水卫生规范》均将生活饮用水中 MCs 的卫 生指导限值设为 1.0 μg/L(MC-LR) 。 淡水环境受 MCs 污染日益严重，人类健康及水生动植物的安全受到极大威胁，建立一种 简单、灵敏、快速的 MCs 检测方法具有重要意义。国内外检测 MCs 的方法可以归纳为三种， 即生物毒理学法、化学分析法和免疫检测法。其中，化学分析法应用最为广泛，主要是利用 色谱技术对样品中的 MCs 进行定性、定量分析。但是，环境水体中 MCs 的含量较低（含量通 常为 ng/L-ug/L 水平）且基体复杂，干扰物质较多，通常在测定之前需采用前处理技术进行样 品富集，以达到测定的灵敏度，并消除基体的干扰。因此采用合适的样品前处理技术是准确、 快速测定样品中 MCs 的前提。本文重点介绍了环境水样中MCs 的主要前处理技术，并对其常 用的色谱检测方法进行了总结。 2 色谱检测方法 MCs 的色谱检测方法主要包括高效液相色谱(HPLC)[4] 、薄层层析色谱(TLC)[5] 、毛细管电 泳(CE)[6] 、色谱质谱联用(LC-MS)[7]和(GC-MS)[8]等。其中应用最多的是HPLC法，其次是LC-MS 法，单独用GC和TLC 的情况不多[9] 。 HPLC法分离MCs常采用的色谱柱是反相C18柱和酰胺C16柱，流动相采用含一定比例甲醇 或乙腈的水相，并加入一定比例的TFA或酸性的磷酸盐缓冲溶液以保持pH值2.5左右。样品分 离后采用紫外检测器（UV ）或光电二极管阵列检测器（PDA ）进行分析，多数MC在238nm处 有最大吸收峰。相较于UV ，PDA对MC 的分辨率较高，检测限可达ng/L 。Murata等[10]报道了一 种用HPLC-CL （化学发光）检测MC 的方法，检出限小于15pg/L。HPLC法操作简单，重现性 好，能够同时分析不同的MCs异构体。但是由于缺乏商品化的藻毒素标准品， HPLC 的进一 97 步应用受到了限制。LC-MS和GC-MS技术克服了上述缺点，根据藻毒素的分子量可以实现定 性分析。1990年，Quilliam等人首次将LC-MS技术用于蓝藻毒素的检测中[11] 。质谱检测器可测 定分子量和洗脱化合物的重要分子片段，检测结果特异性好。目前已报道的用于分析MC 的检 测器有ESI[12] 、FAB[13]和MALDI-TOF[1