电喷雾串联质谱分析附子炮制中的化学成分变化.pdfVIP

第35卷 分析化学(FENxlHuAxUE)研究报告 第7期 Chinese of 959～963 2007年7月 Joumal Chemistry Anal”ical 电喷雾串联质谱分析附子炮制中的化学成分变化 越皓1’2 皮子凤1 赵宇峰1’2 宋凤瑞1 刘志强1 刘淑莹¨ 1(中国科学院长春应用化学研究所，长春质谱中心，长春130022) 2(中国科学院研究生院，北京100039) 摘要利用电喷雾质谱方法(EsI．Ms)分析了附子加辅料(甘草)炮制前后水煎液中二萜类生物碱在种类和 含量方面的变化，通过加入内标化合物，建立了电喷雾质谱的半定量分析方法。此方法具有快速、准确、灵敏 的特点，能够更加全面地反映中药配伍炮制过程中多种化学成分的含量变化，并能根据电喷雾串联质谱的分 析结果鉴定配伍后产生的新的化学成分，在共煎液中的次乌头碱、中乌头碱和乌头碱的相对含量分别是单煎 液中的5．67％、4．05％和4．88％。通过研究附子与甘草的单煎液、共煎液以及药渣中化学成分的变化，揭示 了甘草作为辅料，在炮制过程中对附子减毒作用机理。 关键词附子，炮制机理，电喷雾串联质谱，二萜类生物碱 1 引 言 用[1。】。二萜类生物碱是附子的主要活性成分(表1)，包括双酯型、单酯型和脂类生物碱，其中双酯型 生物碱毒性很大，乌头碱、中乌头碱、次乌头碱的小鼠LD卯分别为1．8m∥kg、1．9mg／kg和 5。8m∥kJ。因此，附子需要通过炮制以达到减毒增效的目的，如淡附片是生附子与辅料甘草(如硪 毒性的药材，并被广泛应用于附子的炮制和配伍中。近年来，对于甘草解附子毒性的化学研究主要集中 在共煎前后个别成分的定量分析[6，7]，对于多种化学成分的全面研究尚未见报道。目前，比较普遍的研 究方法为薄层色谱法(TLC)和高效液相色谱法(HPLc)∞8’9J，选择性和灵敏度不高，且只能定性定量考 察少数化合物。电喷雾串联质谱(EsI—MS)具有软电离、高灵敏度和特异性强等优点，已经应用于附子 成分的定性鉴定[10]及中药复方的成分变化等方面¨卜”】。二萜类生物碱在电喷雾质谱条件下可形成质 子化分子，每个离子峰代表分子量相同的一种或数种生物碱，其归属可通过文献数据和串联质谱结果确 定。由于结构相似，该类化合物分子的电离能力相似，离子峰的相对丰度可以近似地反映同类生物碱的 相对含量，所得数据具有很好的可重复性¨4|。本研究利用电喷雾串联质谱对附子与甘草的单煎液、共 煎液以及药渣的化学成分进行了分析，阐释了甘草在附子炮制过程中的减毒机理，通过添加内标化合 物，建立了电喷雾串联质谱半定量检测附子加甘草炮制前后化学成分含量变化的方法。 表1 乌头中乌头类生物碱的结构 ofaconitumalkaloids Table1 Structure in冗以缸∞Dn饿陆地m如Pr印口m纽 0r or hydmgenou8)；R4：羟基或氢(hydr∞cyl∞hydroge∞u8)。 Rl：甲基或乙基(砥汕y1et}1y1)；R3：是羟基或氢(hydr0】【yl 2006一lO-28收稿；2007旬3-30接受 本文系国家自然科学基金(No和中国科学院知识创新工程重要方向项目(N0．KGc)(2—SW-213_0|6) ·E—mail：miab@ciac．jI．cn 万方数据万方数据 分析化学 第35卷 2 实验部分 2．1仪器、试剂与药材 LCQ电喷雾质谱仪(美国TheHrIo—Finnigan公司)。 甘草(长春市吉林大药房)；生附子(四川江油饮片厂)，经过长春中医药大学王淑敏教授鉴定；乌头 号10289旬001)对照品(中国药品生物制品检定所)。甲醇为色谱纯，其它试剂均为分析纯。 2．2样品制备 将生附子lO