免疫亲和柱净化-液相色谱-串联质谱法测定海洋生物中河豚毒素.pdfVIP

第43卷 分析化学 (FENXI HUAXUE) 研究报告 第2期 2015年2月 ChineseJournal of Analytical Chemistry 277~281 DOI:10.11895/j.issn.0253-3820.140704 免疫亲和柱净化-液相色谱-串联质谱法测定 海洋生物中河豚毒素 1,3 *1,3 2 2 2 严忠雍 张小军 李奇富 王 莹 柳家鹏 1,3 1,3 4 龙举 祝 银 杨会成 1 2 (浙江省海洋水产研究所,舟山316021) (江苏美正生物科技有限公司,无锡214135) 3 4 (浙江省海洋渔业资源可持续利用技术研究重点实验室,舟山316021) (浙江省海洋开发研究院,舟山316021) 摘 要 建立了海洋生物中河豚毒素的免疫亲和柱净化-液相色谱-串联质谱分析方法。 采用 1%乙酸-甲醇 提取样品,提取液通过磷酸盐缓冲液稀释,调节至pH7 ~8,经免疫亲和柱富集和净化后,LC-MS/ MS测定,外 标法定量。 在ACQUITY UPLC BEH Amide亲水柱上进行分离,流动相为乙腈和含有0.1%甲酸的5 mmol/ L 乙酸铵溶液,梯度洗脱,电喷雾正离子多反应模式监测。 河豚毒素在0.3 ~20.0 μg/ L线性范围内,相关系数 大于0.997,定量限为0.3 μg/ kg,回收率为88.7% ~102.3%,相对标准偏差2.0% ~6.4%。 本方法重现性 好、灵敏度高,适用于海洋生物中河豚毒素的测定。 关键词 免疫亲和柱;液相色谱-串联质谱;海洋生物;河豚毒素 1 引 言 河豚毒素(Tetrodotoxin,TTX)是一种天然海洋生物神经毒素,分布广泛,主要存在于河豚鱼中,圆尾 鲎、蓝环章鱼、螺类等其它海洋生物中也有存在。 河豚毒素毒性极强,食用0.5 mg就可致人死亡,其带 + 正电荷的胍基能伸入钠通道的离子选择过滤器,和通道内壁上的游离羧基结合,阻碍Na 进入,从而抑 制神经冲动的传导,使人感觉神经麻痹,四肢瘫痪,呼吸困难,最后因呼吸抑制而死亡[1~4]。 我国每年都 有因食带有TTX 的海洋生物而导致中毒的事件发生。 鉴于河豚毒素的严重危害,有必要建立一种简 [5] 便、快速有效检测河豚毒素的方法。 目前,河豚毒素的检测方法有生物测定法 、高效液相色谱法 [6,7] [8~11] [12] (HPLC) 、液相色谱串联质谱法(LC-MS) 及酶联免疫法(ELISA) 等。 其中,生物测定法一般 需要专门动物,适用性差,且操作繁琐,费时费力重复性差;酶联免疫法虽特异性强,但酶联免疫反应耗 时长,操作难度较大;液相色谱串联质谱法灵敏度高,但现有的文献方法检出限偏高,前处理复杂,且采 用的固相萃取技术净化样品不理想、易受基质干扰,回收率低。 免疫亲和柱(IA