70210702 重组 DNA 技术 2005 附加测试题 参考答案.pdfVIP

麻省理工大学生物学教研室  7.02  实验性生物学  交流, 2005 年 春                                              7.02  2004 秋                                                     RDM 考试复习题              7.02/10.702 重组DNA 技术  2005 春  附加测试题  参考答案        7.02  2004 秋                                                    RDM 考试复习题    问题13     a) 长度应为：  1.  全部4 种dNTPs (dATP, dCTP, dTTP, dGTP):  _____ 300 bP_______________   2.  全部4 种dNTPs (dATP, dCTP, dTTP, dGTP)和ddGTP:  __ 34, 36, 38, 42 bp_________                                                 （其他的与模板中的Cs 位置一致）  3.  3 种 dNTPs (dGTP, dATP, dCTP)和ddTTP:  ___   32 bp_____________    b)    记住: 体内DNA 合成总是从5’‐3’开始进行的。(下一位核苷酸加到上一位核苷酸 的3’ OH 。) 这是DNA 聚合酶的固有特性！      c) 引物 2+3: 没有指数性增长的扩增产物，因为两个引物背对背朝不同方向延伸！  引物  1+3: 没有指数性增长的扩增产物，因为引物结合到相同的链！    为了获得PCR 产物，你需要两个引物，这两个引物分别结合到互补的模板链，且彼此面对 面（一个引物介导的合成方向朝向另一个引物）。通过这个方法，你可在反应每个循环产生 新引物的结合位点——即，一系列新的“模板DNA”分子——并获得指数性扩增！！  这些引物系列中没有一个合乎此标准。    d) 平均每(1/4)4 碱基对中可出现相应的引物结合位点，或每256 个碱基对出现一次相应的 引物结合位点。因此，4 个碱基对组成的引物将与基因组中的许多位点结合，而不是特 异性地与你的目的序列结合。    7.02  2004 秋                                                    RDM 考试复习题    问题14  a) 正向引物：结合到“内环”链；DNA 合成顺着插入片段的方向；在pUC19 序列而非插 入序列内部。反向引物：结合到“外环”链；DNA 合成顺着插入片段的方向；在pUC19 序列而非插入序列内。注意针对A 和B 的引物能/应当是一样的！    b) 5 个需要的试剂是：dNTPs;  ddNTP;   DNA 聚合酶;  引物; 模板DNA.    c) ddNTPs 不能体内使用。 ddNTPs 导致DNA 合成的终止，因为缺少下一个核苷酸加入所 需的3’ OH 基团。    d) 答案：基因2。理由：基因2 具有最高的“得分”和最低的“E 评价”；这些是那些与进 入BLAST 的序列最密切相关的序列的标志（这里，PCR 产物源自质粒A ！）