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第九章 临床常见病原体检测 周俊英 中南医院检验科 病原体检测的意义 循证医学的要求 抗感染药物的使用和更换要有相应的病原微生物实验诊断依据 诊疗规范的要求 感染性疾病都应该进行病原学检查 第一节 临床标本采集 好标本——好的实验诊断结果 根据病原体所致感染的病程确定标本采集的时间、部位和种类 病原学实验诊断标本必须无菌采集和运送 采集标本时，不能接触消毒剂和抗感染药物 标本必须注明必要的临床资料 采集的标本要及时送检 注意生物安全 血培养标本的采集和运送 采血时间：尽可能在患者寒战或开始发热时采血; 抗生素治疗前采血;如患者已经应用抗菌药物进行治疗，应在下一次用药之前采血。 采血量：成人10-20ml，儿童1-5ml 运送：血培养瓶 注意：采血后的血培养瓶切勿冷藏 采血次数 一般24h内采集2～3次 特殊的全身性和局部感染者采血培养的建议 1 可疑急性原发性菌血症、真菌菌血症、脑膜炎、骨髓炎、关节炎或肺炎，应在不同部位采集2～3份血标本。 2 不明原因发热，如隐性脓肿，伤寒热和波浪热，先采集2～3份血标本，24～36h后估计体温升高之前（通常在下午）再采集2份以上。 3 可疑细菌性心内膜炎，在1～2h内采集3份血标本，如果24h后阴性，再采集3份以上的血标本。 采血套数 表皮葡萄球菌的临床意义 脑脊液与其它无菌体液 正常人脑脊液和体液是无菌的 中枢神经系统感染的病原体有细菌、真菌、病毒等 标本采集与运送 穿刺方法：无菌方法采集脑脊液3～5ml，无菌试管或无菌小瓶送检 采集的脑脊液采集保温送检或床边接种 腹膜透析液标本至少采集50ml 取沉淀物显微镜检查，快速查见病原体 检验时要同时兼顾细菌、真菌或病毒的感染 临床意义 细菌性脑膜炎最常见，病原菌主要有脑膜炎奈瑟菌、肺炎链球菌、流感嗜血杆菌等 结核性脑膜炎呈回升趋势，为防治重点 真菌性脑膜炎主要病原菌为新型隐球菌，好发于免疫功能低下和恶性疾病患者 流行性乙型脑炎是乙脑病毒感染的病毒性脑炎，属自然疫源性疾病，通过蚊虫叮咬，在人兽间传播 肠道病毒对中枢神经系统的感染：脊髓灰质炎病毒和新型肠道病毒 创伤、组织和脓肿标本 采集部位首先清除污物——防止表面污染菌混入 采集方法： 大面积创伤——不同部位采集多份标本 开放性脓肿——无菌棉试采取脓液及病灶深部分泌物 厌氧菌感染——取脓后立即排尽注射器内空气 注意：陈旧性脓液含活菌较少，脓血标本含活菌较多 呼吸道标本 种类：痰标本，鼻咽拭子，通过气管收集的标本。 清洁口腔和牙齿、用药前深咳痰液直接吐入无菌容器中，标本量应≥1ml 标本室温保存≤2h 经气管无菌收集的标本最理想 痰合格标本的判定 分类 WBC 鳞状上皮细胞 6 25 25 5 25 10 4 25 10-25 3 25 25 2 10-25 25 1 10 25 分类中1～3类不做培养，要求重新留取标本；4、5类为合格标本；6类为气管穿刺液时，如未见白细胞，而鳞状上皮细胞10/低倍，亦应重新留取标本 临床意义 引起呼吸系统感染的病原微生物种类繁多 原发性肺炎的常见致病菌是肺炎链球菌、金黄色葡萄球菌、流感嗜血杆菌、肺炎支原体、衣原体等 医院获得性肺炎常见的病原菌是革兰阴性杆菌 通过空气和飞沫传播的病原菌，都可以引起呼吸系统感染 粪便标本的采集 送检指征 粪便涂片镜检白细胞≧5/HP 重症腹泻 体温大于38.5℃ 血便 便中有脓液 未经抗菌药物治疗的持续性腹泻患者 来自疫区的患者 粪便标本采集和运送 自然排便，要选取含脓、血、粘液部分送检 排便困难者和婴儿可用直肠拭子取代 及时送检（2h内），防止标本干燥 选择恰当的选择培养基 外送标本要使用运送培养基 尿液标本的采集 清洗外阴或尿道口，前段尿排去，将中段尿约10?20ml直接排入专用的无菌容器中 尽量采集晨尿标本，保证尿液在膀胱内停留4h以上 必要时采用导尿或膀胱穿刺法取尿 泌尿生殖道标本的采集 拭子的选择——藻酸盐拭子或涤纶拭子 根据不同疾病采集不同标本，如性传播疾病常取尿道口分泌物、外阴糜烂面病灶边缘分泌物阴道宫颈口分泌物和前列腺液等。 除淋病奈瑟菌保温送检外，所有标本4℃保存。 血清标本 用于检测患者特异性抗体及效价 二 检查方法 显微镜镜检 病原体抗原检测 病原体核酸检测 病原体的分离培养和鉴定 血清学实验 第二节 病原菌耐药性检测 抗菌药物敏感性试验 细菌耐药机制和耐药性监测 World Health Oganization 一、抗菌