细胞支原体污染的荧光检测方法.docVIP

细胞支原体污染的荧光检测方法DNA荧光染色法： 1.原理：利用荧光染剂（bisbenzimide, Hoechst 33258）侦测支原体污染。此染剂会结合到DNA之Adenosine-Thymidine (A-T) rich区域，因为支原体之DNA中A-T含量占多数（55～80%），所以可将其染色而侦测。被支原体污染之细胞经染色后，在细胞核外与细胞周围可看到许多大小均一之荧光小点，即为支原体之DNA，证明有支原体之污染。 2.测试步骤用间接步骤，将待测细胞悬浮液或细胞培养 液接种于指示细胞培养液中（indicator cell，例如Vero cell or 3T6 cell），然后培养指示细胞再作荧光染色。正负反应对照组亦可以接种于indicator cell内作为对照。 3.待测细胞亦可作直接测试，但需为吸附型细胞，培养后直接作荧光染色。有些细胞易有荧光背景，而干扰结果判读，则建议使用接种于指示细胞之步骤。 4.特点：简单、经济与灵敏，广泛使用，可作为例行之侦测步骤。可以侦测不易培养之支原体，例如M. hyorhinis，较直接培养法快，约一星期即可知道结果。 5.缺点：有时仍会有荧光背景，影响判读。 材料： 1.Hanks’ balanced salt solution without NaHCO3 or phenol red (HBSS, GibcoBRL 2