多药耐药相关蛋白3表达与肝癌耐药的相关性_临床医学论文.docVIP

多药耐药相关蛋白表达与肝癌耐药的相关性_临床医学论文 多药耐药相关蛋白表达与肝癌耐药的相关性_临床医学论文 作者：郭晓林 姜雅秋 金清龙 【摘要】 　　目的 探讨多药耐药相关蛋白（MRP）的表达与肝癌耐药的相关性。方法 应用RT方法检测正常肝细胞L、肝癌细胞BEL及肝癌耐药细胞HepG2/ADM中MRP的差异表达，再将MRP反义及正义寡核苷酸片段分别用脂质体转染进肝癌耐药细胞HepG2/ADM中，用MTT法、流式细胞仪及RT检测转染后细胞内阿霉素（ADM）的荧光强度、耐药指数及MRP的表达情况。结果 肝癌耐药细胞HepG2/ADM中MRP的表达明显高于正常肝细胞L和肝癌细胞BEL（0.05）。MRP反义转染进耐药细胞后，可明显降低细胞内ADM的耐药指数，提高细胞内ADM浓度（0.05），细胞内MRP的表达较未转染细胞下降了62.5%（0.05）。结论 MRP的高表达可能是导致肝癌多药耐药的机制之一。 【关键词】 肝癌；多药耐药；多药耐药相关蛋白 【Abstract】 Objective To explore the relationship between the expression of multiM were detected by RTPCR. Anti and oligonucleotide of MRP3 were transfected by lipidosome into HepG2/ADM, intracellular doxorubicin (ADM) fluorescence intensity, resistance index, and the expression of MRP3 mRNA were detected by MTT, flow cytometry, and RTPCR. Results The expression of MRP3 in HepG2/ADM was higher than that of normal hepatocyte L02 and hepatocarcinoma cell BEL. After transfected with antioligonucleotide MRP3, ADM fluorescence intensity, resistance index, and the expression of MRP3 mRNA were all obviously decreased (P＜0.05). Conclusions Higher expression of MRP 【Key words】 Hepatocarcinoma; Multi 　　肿瘤细胞多药耐药产生的分子机制非常复杂，在所有耐药机制中，被认为是最主要的也是人们研究最多就是ABC结合核膜转运蛋白，如P糖蛋白（P）、多药耐药相关蛋白1(MRP及乳腺癌耐药蛋白；而最近又发现几个多药耐药相关蛋白的新成员多药耐药相关蛋白、MRP、MRP〔1～4〕，为探讨MRP与肝癌耐药的相关性，我们从分子水平研究MRP在肝癌耐药细胞株HepG2/ADM与肝癌细胞株和正常肝细胞株中的差异表达情况，为肝癌的多药耐药提供实验依据。 　　1 材料与方法 　　1.1 细胞株及来源 　　人肝脏细胞系L和肝癌细胞系BEL购自中国科学院上海细胞生物学研究所。人肝癌耐药细胞HepG2/ADM购于广州市达晖生物技术有限公司。 　　1.2 主要试剂、材料与仪器 　　阿霉素标准品、MTT均购自Sigma公司，RNA提取试剂盒、Trizol试剂及逆转录酶M均为为Invitrogen产品；DNA聚合酶为大连宝生物工程有限公司产品；显色试剂盒ECL Western印迹试剂为Amersham产品。Microplate Reader450酶标仪；GeneAmp PCR System 2400 型PCR 扩增仪；EPICS 型流式细胞仪；AlphaEaseFC凝胶成像系统。 　　1.3 RT法检测MRP3 mRNA的表达 　　采用Trizol一步法提取细胞总RNA，M逆转录酶进行逆转录及PCR扩增，合成cDNA。以β作为内参照。PCR引物序列为MRP3 (107 bp)：上游5′下游5′；β：上游5′GTGGGGCGC CCCAGACACCA3′,下游5′CTCCCTTAATGTCACGCACGATTTC3′；扩增条件为：94℃预变性5 min，94℃30 s，55℃30 s，72℃1 min，25个循环，72℃延伸7 min。PCR产物经1.5%琼脂糖凝胶电泳分离，在多向分析凝胶成像系统中观察。 　　1.4 MRP寡核苷酸的转染 　　参照脂质体说明书进行转染。HepG2/ADM细胞消化后计数，分别接种于6孔细胞贴壁，