大麻素WIN55,212-2对体外培养牛眼小梁细胞前列腺素E2表达的影响_临床医学论文.docVIP

大麻素WIN55,212-2对体外培养牛眼小梁细胞前列腺素E2表达的影响_临床医学论文 大麻素WIN55,212-2对体外培养牛眼小梁细胞前列腺素E2表达的影响_临床医学论文 【摘要】 目的 研究大麻素WIN55,212-2对体外培养的牛眼小梁细胞前列腺素E2(PGE2)表达的影响,从而探讨其降眼压机制。方法 采用组织块培养法对牛眼小梁细胞进行原代培养,取传3代的细胞运用酶联免疫吸附(ELISA)法测定不同浓度大麻素WIN55,212-2作用后细胞上清液中PGE2水平的变化;运用RT-PCR方法检测不同浓度大麻素WIN55,212-2作用后PGE2 mRNA在小梁细胞内的表达水平。结果 细胞上清液中的PGE2水平与细胞内PGE2 mRNA水平随大麻素浓度变化呈剂量依赖性升高。结论 一定剂量的大麻素可以促进小梁细胞分泌PGE2,从而达到降低眼压的目的。 【关键词】 大麻素WIN55,212-2;小梁细胞;前列腺素E2;前列腺素E2 mRNA 　　Abstract：Objective To study the effect of WIN55,212-2 on the expression of PGE2 in cultured bovine trabecular meshwork cells (TMCs) and discuss its mechanism of reducing the intraocular pressure. Methods TMCs were obtained through the cultured tissue, bovine TMCs were prmiarily cultured and subcultured. The third generation bovine TMCs were incubated with different dosages of WIN55,212-2 and the supernatant was collected. The concentration of PGE2 in the medium was measured by ELISA method. PGE2mRNA in TMCs was analyzed by RT-PCR. Result PGE2 in the supernatant and PGE2mRNA in TMCs increased depending on the dosages of WIN55,212-2. Conclusion Certain concentration of WIN55,212-2 may promote PGE2 secretion of TMCs, so as to reduce the intraocular pressure. 　　Key words：WIN55,212-2;trabecular meshwork cell;PGE2;PGE2 mRNA 　　大麻素是包括从大麻植物中提取的、人工合成的以及存在于动物体内的内源性大麻素样物质在内的一类具有生物学活性的物质,很早以前就有使用大麻素的天然提取物治疗疼痛、精神病、破伤风等疾病的记载[1]。近年的研究表明,大麻素WIN55,212-2局部应用具有明显的降低眼压作用[2],而内源性的大麻素N-花生四氢酸氨基乙醇(anandamide,AEA)已经被证实可以促进前列腺素(PG)生成从而起到降低眼压的作用[3]。但目前大麻素WIN55,212-2的降眼压机制尚不清楚。为此,本实验选用大麻素WIN55,212-2作用于牛眼小梁细胞,运用酶联免疫吸附(ELISA)、RT-PCR方法检测不同浓度的大麻素作用后小梁细胞上清液中前列腺素E2(PGE2)水平及小梁细胞内PGE2 mRNA表达水平的变化,探讨大麻素WIN55,212-2的降低眼压机制。 　　1 实验材料 　　1.1 主要试剂及药物 　　大麻素WIN55,212-2及TocrisolveTM 100溶剂(上海优宁维生物科技有限公司),胎牛血清(杭州四季青生物工程公司),神经元烯醇化酶(NSE)、波形蛋白及第Ⅷ因子相关抗原、PGE2-ELISA试剂盒(美国Ramp;D公司)。 　　1.2 标本的采集 　　牛眼4只(出生24 h内的小牛处死后于4 h内取小梁组织)。 　　2 实验方法 　　2.1 体外牛眼小梁细胞的培养 　　参考文献[4]细胞培养方法,牛眼用0.1%新洁尔灭、自来水和60%酒精冲洗消毒后置于无菌D-Hank’s中,在超净工作台中剪除角巩膜缘后3～5 mm的球后组织,分离眼前节,保留完整虹膜组织,置于含少量D-Hank’s液的无菌培养皿中,在体视显微镜下分离小梁组织(乳白色疏松网状组织)。将组织块在