表达Asia+1型FMDV复合多表位枯草芽孢杆菌的构建及实验免疫.pdfVIP

病毒病一猪口蹄疫 3小结与讨论 以动物病毒作为载体的基因T程疫苗，近年来成为分子牛物。≯研究的热点之一。其原因是：病 毒的基因组结构简单，易于改造和操作，而且转染效率高，又有较高的靶细胞特异性。本研究使用 的PRV TK～／gE。／LacZ+突变株是将PRVEa株TK基因缺失，并在gE编码【x．插入LacZ+辰达盒，该 毒株}}I丁缺失伪狂犬主要毒力基因TK基凶，从而大大降低了伪狂犬病毒的毒力，同时PRV具有遗 TK 传性状稳定、遗传背景清楚、基冈组约150kb，能容纳40kb以[：的外源基因在其中表达；并且PRV 一／gE／Lacz+作为疫苗株时牛产简单，在原代鸩胚成纤维细胞．【：增殖的滴度能达到lO札oTCID50以卜。 另外， PRvTK／gE‘／Lacz+在表达其他病原体的免疫原性基因时，还能诱导较高水平的干扰素， 极大地增强了其抗病毒能力。 疫原性基因，含有FMDV的5个抗原位点，目前它已在腺病毒、痘病毒等载体中得到表达。2A基因 参与病毒蛋白的裂解，3C蛋白酶基冈催化P1聚蛋白的次级裂解，与成熟病毒样颗粒的组装与形成 密切相关。把O型口蹄疫的P12A3C基测作为抗原摹冈重组到PRV TK儋E／LacZ+突变株中，以达 到构建O型几蹄疫与伪狂犬二价基因上程疫苗的目的。 中，通过问接免疫荧光可以证实P12A3C基因在细胞t}·得剑表达，为构建O型口蹄疫与伪狂犬二价 基因T程疫苗奠定了基础。 参考文献(略) 表达Asia1型FMDV复合多表位枯草芽孢杆菌的构建及 实验免疫 胡博李昌鲁会军 李霄杜寿丈朱战波叶明韩佳丽 金宁一 (军事医学科学院军事兽医研究所全军基因工程重点实验室长春130062) U蹄疫(Foot-and．MouthDisease，FMD)是由[]蹄疫病毒(Foot—and-MouthDiseaseVims，FMDV) J。 其中在我[日流行的FMDV丰要是Asial型和O犁，近年来A掣FMD在我国新疆、上海等地区也有流行。 FMD的每一次暴发都会给国家带来^人的绎济损失，为此我[目对FMD的防控丰要采用捕杀和普遍 免疫相结合的政策。目前我[闷广泛使用的FMD疫苗丰要是灭活苗，尽管其在FMD防治lfl占有重要 地位，但在牛产和使用过程中仍然存在病毒扩散、灭活／1i彻底等安全隐患，因此，研制新掣FMD 疫苗成为研究的义一热点。 FMD新型疫苗主要包括基凶上稗哑单位疫苗、合成肽疫苗、基因缺失疫苗、核酸疫苗以及活 载体疫苗等。其中活载体疫苗以其携带基凶片段人，易于构建多价疫莆，本身具有免疫佐剂的作用， 免疫效果长久，能刺激机体产生系统和黏膜免疫反应，批量牛产成本低等优点，已成为疫苗研究领 域的热点。活载体疫苗土要包括活病毒载体疫苗(如痘病毒、腺病毒、疱疹病毒等)和活菌载体疫 鸡痘病毒为载体，对f1蹄疫活病毒载体疫苗进行了，“泛的研究，获得了多个具有较高免疫效果的候 选疫苗株。在活菌载体疫苗方面，刘明秋等15I以减毒沙门氏菌为载体，构建抗。型f1蹄疫病毒的重 组活菌苗，以口服免疫途径免疫家兔，获得了较强的细胞免疫和体液免疫应答。李云岗等【6’，J以乳 酸杆菌为载体，构建了含有VPl基因的活菌载体疫苗，免疫实验证明其能够在小鼠和猪体内刺激产 生抗FMDV的特异。陀B细胞和T细胞反应。 枯草芽孢杆菌在自然界中广‘泛分布具有蛋白分泌能力强、发酵性能良好、小具有致病性等特点， 374 第四次猪病学术研讨会会议论文集 是活菌载体疫苗的良好候选载体，但目前对枯草芽孢杆菌活菌载体疫苗的研究报道较少。本研究以 枯草芽孢杆菌lA75l为宿土菌，以本实验室自主构建的枯草芽孢杆菌载体pBC38C为表达载体，构 建了串联表达Asia l 位的表位重复和辅助分子CTB的加入来增强疫苗的免疫效果，从而为FMD的基因工程疫苗和枯草芽 孢杆菌活菌