耐氟喹诺酮类嗜麦芽窄食单胞菌gyrA基因突变地研究.pdfVIP

·44· 耐氟喹诺酮类嗜麦芽窄食单胞菌gyrA基因突变的研究 陶传敏李萍吕晓菊潘培根 嘈麦芽窄食单胞菌(st曲：血cPh：mcn日smaltophilia)外膜渗 透性低。对多种抗生紊天然耐药。复方新诺明对该菌具有很 强的体外抗菌活性，但其属于抑菌剂。且单独使用很快会产生 段。由北京赛百胜生物工程公司合成。 耐药性，故不适用于中重度感染【l】。氟喹诺酮类抗菌药物 二、方法 (丑∞f：羽，抽]he日，啪)是一种广谱、高教的抗菌剂且可单 1．细菌染色体DNA的提取：选择对环丙沙星MIC≥ 独使用，对革兰阳性菌和革兰阴性苗都显示良好的活性，因而 2mg／L且主动外排机制阴性的菌株和嗜麦芽窄食单胞茵 给临床治疗带来很大帮助。然而近年来随着FQNS在临床上ATCCl3637，用维特洁小量基因组纯化试剂盒提取嗜麦芽窄 的广泛使用，细菌对其的耐药率上升很快，赖福才口1等报道 食单胞的染色体DNA，操作步骤按照说明书进行。 reactlfⅪl。 134株嗜麦芽窄食单胞苗中环丙沙星MIC2mg／L的占49． 2．聚合酶链式反应(pQ岫m∞amplification 7％。而Weiss[到的报道占60．O％。 FQNS的耐药机制主要分为两类：(1)靶位点的改变，即程有限公司。PCR反应体系(50Vd总反应体积)如下：引物各 re- DNA解旋酶或拓谱异构酶喹诺酮耐药决定区域(叩1ind册e xPCR 10 凼tⅢl∞d鼬即injngr咤iom，OgDRs)活性位点的改变，降低了TaqDNA酶1．5U．5mbI】±k，细菌染色体DNA模 与FQNS的亲和力；(2)细胞内药物浓度降低，即膜孔蛋白改板2止，不足体积由消毒超纯水补足。反应程序95C预变性 变降低药物的内流，或者内探性主动外排系统表达增强使药 物的外排增加。这两者都由染色体介导。至今尚未见产酶降 Ge- 解或喹诺酮类修饰而造成细菌耐药的报道…。除有一篇报告 PER趼卧日n2400型上进行。 ne．AInp 质粒舟导FQNS耐药的肺炎克雷伯菌临床分离株．并在实验 3．琼脂糖凝胶电泳：取5出扩增产物在159／L琼脂糖凝 lad- 室可传递给大肠埃希菌外，少有质粒介导FOJqS耐药性的报胶(台0．5mg见澳乙锭)电泳。80V40min，用DNal00bp der 道[5】。 Mark。作分子量标记，并用全自动凝腔成像分析系统(美 国BIO-RAD公司)中成像分析。 FO．NS主要作用于Ⅱ类拓谱异构酶，即DNA解旋酶和拓 谱异构酶Ⅳ。DNA解旋酶由两个GyrA亚基、两个GyrB亚 基组成；拓谱异构酶Ⅳ由两个PaxC亚基(与Gm同源)和两公司提供的PCR产物纯化试剂盒进行纯化，操作步骤按说明 个ParE亚基(与C,yrB同源)组成。以金黄色葡萄球菌和肺炎 ABIPRISMM。del 链球菌为代表的革兰阳性菌，拓谱异构酶Ⅳ为FO．NS的主要 3700型)进行核苷酸序列测定，由上海基 作用靶位。DNA解旋酵为次要作用靶位；以大肠埃希苗和铜 康生物技术有限公司提供。 绿假单胞菌为代表的革兰阴性菌，DNA解旋酶为FO．NS的主 =、结果 要作用靶位，拓谱异构酶Ⅳ为次要作用靶位MJ。有关嗜麦芽 窄食单胞菌对FONS耐药的机制尚不清楚。相关文献仅2