免疫组化染色影响因素地研究.pdfVIP

免疫组化染色影响因素的研究 李靖郑晓霞 吕占军 (河北医科大学实验动物中心免疫学01研050017) 摘要 目的本实验研究第二抗体对免疫组化染色结果的影响。用不同公司二抗产品 对相同病理标本做免疫组化染色，图像分析系统分析染色结果并比较。不同公司的产品在组化 染色中结果有显著性差异。传统的二抗制备方法制备的二抗，在对不同亚类单克隆抗体的染色 结果并不稳定，考虑用不同亚类单抗作免疫原分别制备二抗后混合的方法，制备反应稳定的第 二抗体。 关键词第二抗体免疫组化 引 言 自19世纪中叶，免疫学成为--fq独立的科学，就以日新月异的速度发展着，成为生命科 学的前沿科学。T而随之建立发展的免疫学技术更是被广泛应用于生物、医学基础研究及 临床医学实践的广泛领域中…。其中，标记免疫技术(1abeled inununoassays)应用尤为广泛， 用来测定蛋白质、多肽、核酸等各种生物活性物质”“j，从而提高了诊断和研究水平，促进了 生物医学的发展。标记免疫技术是将多种标记技术与免疫学技术相结合而建立起来的技术 系列，它的发展与标记技术、单克隆抗体技术和分子生物学的发展紧密联系。在现在应用的 绝大多数标记技术中，第二抗体是不可缺少的一种试剂。不论是从1941年Coons及其同事 发表免疫荧光技术“，还是嗣后不断发展及广泛应用的放射免疫标记技术、免疫酶标技术、 免疫胶体金技术，到现在由酶标技术衍生出来的免疫发光技术”J，其中不可或缺的都是第 二抗体。第二抗体质量的好坏关系重大，因为这些技术已广泛应用于临床诊断及实验室研 究，试验结果也由最初的定性发展到半定量、定量。不准确的数据可能会带来的后果不敢想 象。 由于酶标免疫技术操作简便，对实验条件要求较低，被广泛地用于实验室研究及临床诊 断中，免疫组化就是一种应用较广的技术”1。随着免疫组化不断的应用，由于问题的不断 发现，方法也在不断被改进，从直接法到间接法，到现在大家认为以LAB．SA法最为优越”1。 不论检测步骤、标记物、标记方法及底物配置等方面都在不断发展。自从利用杂交瘤技术制 备单克隆抗体以来，大量特异性强、纯度高的单克隆抗体被生产出来，为免疫组化的应用开 辟了新的前景。””o。近年来，抗体制备技术及一步发展，如生物工程抗体及基因工程抗体 使得免疫组化技术得以更广泛的推广应用(13)。 但是，在免疫组化的实际应用中，其染色结果并不尽如人意，相同的标本组化结果在镜 下结果．即是否着色及着色部位应该是一致的。为了使免疫组化的结果稳定一致，科研人员 作了大量的实验研究影响染色的因素(14)。例如固定剂的影响、脱蜡的影响、抗原修复、强 调对照的作用、自备试剂的质量、底物浓度的影响等(15)(16)(17)(18)(19)(20)。 第二抗体的制备在国外80年代就较为成熟(21)，国内也用许多第二抗体产品。现在 toni E1．：031I一6266844 mail@126 E—mail：lijing 制备抗IgG抗体方法多是从多只动物血清中提取19c，纯化后作为免疫原免疫异种动物制 备二抗(22)一(25)前面已经提到，现在的免疫组化技术中应用了大量的纯度高单克隆抗 体，单克隆抗体是均质的，一株抗体就是一种亚类。现在应用较多的小鼠单抗，共用四个亚 类，这四个亚类在血清中的浓度差别很大(26)。本实验的出发点是考虑是否在制备抗小鼠 16；的第二抗体时，由于血清中四种亚类的比例的差异，造成制备的第二抗体对四种亚类单 抗的亲和力不一，从而使染色结果并不稳定。本实验目的是比较市售二抗产品的染色结果 是否一致，考虑是否第二抗体对染色结果有影响。 方 法 1分组 共取了12例病人组织，每例组织切9张病理切片，为一组。比较不同二抗产品染色结 果用12例组织，共12组。 2组织石蜡切片的制备(22)一(28) 中性福尔马林固定，常规方法制备石蜡组织标本，标本厚度为5um。 3免疫组化染色 用S-P法，石蜡切片常规脱蜡，按照SP-9002试剂盒说明进行操作，每组标本①②③号 加单抗①(鼠抗人雌激素调节蛋白(pS2 peptide)单克隆抗体，IgGl)