合浦珠母贝珍珠囊形成过程中碱性磷酸酶活性变化地研究.pdfVIP

机遇 ·挑战 ·创新 2002年 合浦珠母贝珍珠囊形成过程中碱性磷酸酶活性变化的研究 林静瑜 ，‘谢莉萍2 (1.集美大学生物工程学院;2.清华大学生物科学与技术系) 摘 要:以合浦珠母贝(PinctadaFucata)为实验材料，研究在珍珠囊形成过程中，其外套膜上碱性磷酸酶(ALP)相 对比活力的变化，发现开始几天，ALP的相对比活力下降，但在两周后 相对比活力持续升高.PVP,ATP和促珠泌 素的梯度实验表明，最适的浓度分别为1%x,0.01%和1%。从混合药物的实验结果发现，本实验所采用的试剂对 ALP均有活化作用，但经益贝宝预处理过的贝对药物的敏感性降低 关健词:合浦珠母贝;城性磷嫂踌;珍珠t;吟活性 中圈分类号’S958X.2‘ 合浦珠母贝(PinctadaFucats)，又称马氏珍珠 1.2 方法 贝，是目前世界上用于海水珍珠生产的主要贝类，其 1.2，1 插核 育珠量占海水珍珠产量的85%以上。我国广西北部 挑选一批 1.5龄的合浦珠母贝，用益贝宝溶液 湾是合浦珠母贝养殖育珠的优良海域，生产的珍珠 浸泡15min后，在外套膜内插人直径约为2mm的 又称 “南珠”，以质地细腻凝重、光润晶莹、浑圆剔透 圆形石蜡核。分别在手术后4,8,12,16,20,24,28, 而驰名。珍珠的质量决定了珍珠的价格，珍珠的质量 32,36,40d剖取材料，检测ALP比活力的变化。 是包括大小、形状、光泽、颜色、珍珠层厚度和有无瑕 1.2.2 碱性碑酸酶的提取 疵等几种因素的综合，而珍珠层厚度是有核养殖珍 剖取实验贝的外套膜组织，加人1mL0.01 珠最重要的质量指标。近几年，由于人们盲目扩大珍 mol/LTris-HCI缓冲液(pH8.9)，手工匀浆，在冰浴 珠的养殖规模，导致所生产出来的珍珠质量不高，不 中用细胞破碎仪破碎，然后在4C冰箱中静置过夜， 但珠农的利益得不到保证，而且还影响了我国珍珠 最后高速离心1min，上清液即为酶制剂。 在国际市场的声誉。 1.2.3 碱性磷酸酶活力的浏定 碱性磷酸酶(AlkalinePhosphatase,ALP)与珍 测活体系如下:总体积2mL，以pNPP为底物， 珠的形成密切相关，它不仅参与角蛋白的合成与分 含0.05mol/LNa,CO,-NaHCO,缓冲液pH9.72,4 泌，还参与贝壳和珍珠质前身物质的形成与矿化川， mmol/LpNPP,2mmol/LMgSO40C温浴 5 本文研究了合浦珠母贝珍珠囊形成过程中ALP活 mm，加人1001A酶制剂，反应10min，用1mL0.2 性变化以及几种药物对外套膜上ALP活性的影响， mol/LNaOH终止反应，以加人100川蒸馏水的测 对提高人工育珠的质量有一定帮助。 活体系为参比，用754分光光度计在405nm下测吸 光值。酶活力单位定义为:在上述条件下，每升溶液 1 材料和方法 每分钟底物水解后产物的微摩尔数。比活力定义为: 1.1 材料 每毫克蛋白所具有的活力单位数Cz] 1.1.1 实脸材料 1.2.4 蛋白浓度的测定 合浦珠母贝采 自广西北海市珍珠总公司珍珠养 采用考马斯亮蓝G-250染色法，以牛血清白蛋 殖场 白为标准。 1.1.2 试剂 1.2.5 PVP,ATP及促珠泌紊对外套膜小片上碱 对硝基苯磷酸(pNPP)为GIBCO产品;聚乙烯 性磷酸酶比活力的影响 毗咯烷酮(PVP)为Amresc。产品;益珠宝、益贝宝、