薄层层析—分光光度法测定南瓜中β-胡萝卜素地研究.pdfVIP

薄层层析一分光光度法测定南瓜中B．胡萝卜素的研究@ 范文秀铀李新峥6朱芳坤。杨鹏鸣6 a(河南科技学院化工系河南新乡453003)b(河南科技学院园艺系，河南新乡453003) 摘要采用石油醚：丙酮(7：3)混合液作提取剂，用薄层层析一分光光度法测定了南瓜中B． 胡萝h素的含量，并对该法的精密度、准确性进行了探讨。在B-胡萝h索的最大吸收波长450nm 之间，回收率在94．50～97．20％之间，检出限为0．5ug 关健词南瓜，B一胡萝I-素，薄层层析，分光光度法 中图分类号0657．32 1．引言 南瓜又名饭瓜、金瓜、倭瓜和番瓜，含丰富的营养素，自古来为人们所喜爱，民间常 以南瓜为药方治疗多种疾病，近年来，随着南瓜营养成分和药理作用的不断研究，人们 越来越重视南瓜的营养保健作用，南瓜被开发为系列保健食品和婴儿食品，需求量不断 增删”。15．嘏萝h素是南瓜的重要营养成分，它在体内可转化为维生索A。另外§． 胡萝h素本身也具有生物活性，是一种极有效的脂类抗氧化剂，可抑制脂类过氧化， 淬灭自由基，抑制自由基的生成，促进儿童生长发育及保护视力【2】，具有抗癌抗心血 管病和抗白内障等保健功能【3，4】。以13-胡萝h素为主要成分的营养保健品、护肤品的 研究与开发日益受到重视。 B．胡萝h含量的测定一般多采用纸层析法【5．司和高效液相色谱法口1，纸层析法分离 效率低，时间长，且13．胡萝h素极易被氧化造成较大偏差。高效液相色谱虽有较好 的分离效果，但需专用设备，且价格较昂贵．薄层色谱分离技术具有操作简单，分离效 率高，时间短等特点嘲，本实验采用薄层层析技术，分离出南瓜中的B．胡萝h素，并采 用分光光度法测定其含量，从而建立一个准确、设备简单的分离测试方法。 2．实验部分 2．1仪器与试剂 UV一1100紫外一可见光光度计(北京瑞利分析仪器公司)，索氏提取器，硅胶 为分析纯)． 2t2样品与标准品 样品：样品采自河南科技学院老校南瓜园。样品1；样品2；样品3；样品4为四 种不同品种的南瓜样品。 啊南省科技攻关项目(0424070050) cn 。作者简介：范文秀，1963生，河南科技学院副教授E-mail：fwxiu@histedu 劳层层析一分光光度法测定南瓜中B．胡萝h素的研究 标准品：13．胡萝h素(美国si鲫公司产品) 13一胡萝h素标准贮备溶液：准确称取B一胡萝I-素25．Omg，用石油醚溶解并定容 至lOOmL，即成250肛g／mL标准贮备溶液。于冰箱中避光保存备用。 且·胡萝^素标准使用溶液：精确量取20．OOmL的标准贮备溶液，以石油醚定容 至lOOmL，配成50口g^ⅡL标准使用液 2．3实验方法 2．3．1标准曲线的绘制． 样于同一硅胶G—O．5％羧甲基纤维素钠薄层板上，冷风吹干，放入以石油醚饱和的层 析缸中层析，待B-胡萝卜素完全分离后，取出层析板，晾干，刮下层析板上含13一 胡萝h素的斑点，用石油醚洗脱后再用石油醚定容至25mL，用uv—l 100紫外一可见 分光光度计，在450rtm波长下测其吸光度。以点样量c(ug)为横坐标，吸光度为纵坐 标，绘制出标准曲线，并求出回归方程。 2．3．2样品处理 取南瓜样品，去皮去瓤，将南瓜切成小块置于60。C左右烘箱中烘约2h，取出后 自然风干，置于干净的小烧杯中存放于冰箱中备用。准确称取15．00009，放入索氏提 取器中，加入石油醚：丙酮(7：3)提取液100mL，60。C下回流提取至无色。将提取液倒 入分液漏斗，以去离子水反复洗涤6次，彻底洗去丙酮及白色杂质。将上层清液倒入 磨口小烧瓶中，于60～70C水浴中加热浓缩后，准确定容至25mL。 2．3．3薄层层析 取一活化好的层析板，用微量注射器将提取样品与标准溶液同时点在层析板上， 以下步骤同标准曲线的制备。 3．结果与讨论 3．1展开剂的选择 本实验分别采用石油醚，丙酮，石油醚：丙酮(4：1)，石油醚：丙酮(1：4)作展开剂， 其中石油醚的效果最好，能使样品液与标液同步分离出13．胡萝h素：且层析展开后 斑点较圆、而后面几种展开剂层析效果不明显，容易拖尾，只有石油醚的效果最好， 故选