基于生物标志物与其变化的苍耳子毒性研究.pdfVIP

基于生物标志物及其变化的苍耳子毒性研究 刘树氏曹敏卢芳 (黑龙江中医药人学，哈尔滨 l 50040) 目前中药的毒性研究主要以传统的毒性评价方法为主，主要集中在单味中约或单味中药中的某 个化学单体的急性、Ⅱ急性和长期毒性实验上，指标的选择也局限在某个脏器的组织形态学的改变 及血液生化指标的检测上，这种认识中药毒性的方法存在其片面性和局限性。本实验运川代谢组学 方法，以超高效液相．15I行时间质谱(UPLC．TOF／MS)为分析手段，研究苍耳子的产生毒性的鼙／时／ 毒之间的关联性及作用机制；通过分析人鼠灌胃苍耳子染毒后其尿液中代谢物谱的变化及其内源性 代谢小分子的动态变化规律，运川主成分分析和偏最小二乘一判别式的模式识别方法获取苍耳子毒性 模型复制过稃中对机体所致毒性反应的完整性信息，找出贡献人的能够反映毒性应答的特异性潜在 毒性生物标忠物，从而找出影响机体止常的代谢通路或扰乱代谢网络，进而阐明苍耳子的毒性靶标 利毒性作，LIj机制。这可为爸耳子的毒性研究提供一个全新的诠释，并对爸耳子及复方的临床安全评 价及有效应川有着深远意义。 l 实验结果 1．1 各组人鼠尿液UPLC．TOF／MS代谢指纹谱的建立 各色谱峰之间的良好分离是保证代谢物信号不损火的关键，也为数据处理结果的可靠性提供保 障。往优化后的分析条件卜．，止负离子扫描模式12min的有效洗脱时间内获得较女r的分离雨l响应效 果，见图l。 8oo 1ooo 图l 同一大鼠尿液uPLC厂roF．Ms分析代谢物指纹总离予流图(Tlc) (A)正离_J，模』℃下采集的TlcI割：IB)负离了模式下采集的l’IC图 1．2苍耳子所致毒性模型人鼠与止常人鼠尿液代谢物组的PCA分析 d后24h人 为了更好的反映苍耳子毒性对人鼠尿液代谢物组扰动，选用苍耳子高剂鼙细给药28 XS软仆进行数据降维 鼠尿液作为t妊性模型纲，相应对照组人鼠尿液作为’；j闩组；分别．HjMarkerIyns m／z 和质谱矩阵信息的获取，得剑Rt peak 模式的士成分分析(PCA)，得剑反应组间变化的Scoresplot，见图2。任U：、负离子扫描模式卜， 两组聚类分组明显，体现两组数据的代谢物表啊!芹片显著。 1．3苍耳子·霉性模型组与止常组人鼠尿液代谢物纠的OPLS—DA分析 进一步采川监督型的止交偏最小二乘．判别式分析方法(OPLS．DA)对两组尿液代谢物组进行分 析，得到反应组间变化的Scoresplot，见图3。从图中可以看出，在止、负离子扫描模式卜』，两组样 晶均能较好的聚类|又：分。 1．4表征苍耳子毒性的潜在生物标志物的筛选 (1)在PCA分析的Scoresplot基础上，为了更直观的反映所有离子对聚类分组差异的贡献率， 贡献率越人，纵向位移越大则置信区间卜．的概率值越人。在s．plot中选择贡献较人的离子，转换成 中的点一一对应。 (2)绘制出以主成分P1为纵坐标反映内源性代谢物离子对组间分类离散趋势贡献程度的 Loadingplot(载荷矩阵图)，可表征对照组和苍耳子毒性模型组人鼠尿液中检测到的所有离子及其相 对含量，纵向高度越人，则相对含量越人，贡献程度越人，见图4(C)、5(C)。 (3)对筛选的差异变量进行峰的提取和手动积分，并进行1卜参数t检验，排除非参数检验结果 中p值人丁．0．05的变量。 综合以上三个原则，初步确定了40个表征苍耳子毒性的潜在生物标志物，其中止离子检测模式 卜22个(表】)，负离子检测模式下l8个(表2)。 妇E(hf叫1l惰州4豳耐砷锄忙0唧 妇∞O州1l性州a嘶叫坤蟹噼Q唧 ” 。 ∞