不同培养基对枯草杆菌黑色变种芽孢抗力影响地研究.pdfVIP

不同培养基对枯草杆菌黑色变种芽孢抗力影响的研究 赵斌秀 王佳琪 孙惠惠 王妍彦李新武 张流波 中国疾病预防控制中心环境与健康相关产品安全所，北京 100021 摘要 目的 比较胰蛋白胨大豆琼脂与营养琼脂培养的枯草杆菌黑色变种芽孢抗力的差异。方法：采 用悬液定量和载体定量杀菌试验进行抗力比较。结果相同培养条件下，胰蛋白胨大豆琼脂与营养琼脂 收获的20ml芽孢液的平均菌量分别为4.52×109cfu/ml和2.16×109cfu/ml;湿热100℃作用20min、 干热160℃作用10min、5000mg/L的邻苯二甲醛作用40min、2000mg/L的二氯异氰尿酸钠作用15min 对两种培养基培养的枯草杆菌黑色变种芽孢的杀灭率均为99.99％。结论 两种培养基培养的枯草杆菌黑 色变种芽孢的抗力无明显差异。 胰蛋白胨大豆琼脂培养基；营养琼脂培养基；枯草杆菌黑色变种芽孢；抗力 37℃干燥后备用。 启动干热灭菌柜，当柜内温度达到设定温度时快速将装有污染芽孢的载体的平皿放入灭菌柜内， 关闭柜门开始计时，当作用至预定时间时取出平皿并快速降温，降温后将试验样片移入含5ml稀释液的 试管中，振打后进行10倍系列稀释，选取适宜稀释度接种平皿，37C恒温箱内培养72h记录试验结果。 阳性对照样片放置于柜外室温下，其余步骤与试验组相同。 2．3中和剂鉴定试验 以枯草杆菌黑色变种芽孢为代表，按照消毒技术规范2．7．7．5项进行中和剂鉴定试验，试验共设5 组。试验结果以3、4、5组组间菌落数误差不超过15％，第l组不长菌或菌数远少于地组，第2组较第3、 4、5组少的试验菌生长，表明所用中和剂及其浓度合格。 2．4化学消毒剂对两种培养基制各的芽胞的杀灭试验 取4ml消毒剂加到无菌试管内，将试管置于恒温水浴5min后加入lml试验菌悬液，立即混匀并计时。 释度进行接种，37C恒温箱内培养72h记录试验结果。阳性对照组以硬水代替消毒剂，其余步骤与试验 组相同。 3结果 3．1两种培养基对芽孢形成数量的影响试验结果 X109cfu／ml，用营 试验结果显示，TSA培养收获的20ml枯草杆菌黑色变种芽孢液的浓度平均为4．52 量相同的情况下，用TSA培养的芽孢数量明显多于是营养琼脂培养的芽孢数量，结果见表1。 表1两种培养基培养的芽胞的计数结果 3．2热力对两种培养基制备的芽胞的杀灭试验结果 ． 条件下，作用20min，均可使两种培养基培养的枯草杆菌黑色变种芽孢的杀灭率达到100％。将同一杀 菌强度对两种培养基培养的枯草杆菌黑色变种芽孢的杀灭率进行非参数mann．whitney．U秩和检验，P 值均0．05，均无显著性差异，结果见表2。 ．393．． 表2热力对两种方法培养芽孢的杀灭效果 注：1．以上数据为5次试验的平均值 3．3中和剂鉴定试验结果 异氰尿酸钠溶液，并且中和剂和中和产物对枯草杆菌黑色变种芽孢的生长均无影响。 3．4化学消毒剂对两种培养基制备的芽胞的杀灭试验结果 种培基培养的枯草杆菌黑色变种芽孢的杀灭率均为99．99％。5000mg／L的邻苯二甲醛作用60min、 100％。将同一杀菌强度对两种培养基培养的枯草杆菌黑色变种芽孢的杀灭率进行非参数 mann．whitney-U秩和检验，P值均o．05，均无显著性差异，结果见表3。 表3消毒剂对两种培养基制备的芽胞的杀灭试验结果 注：1．以上数据为8次试验的平均值。2．以上所示消毒剂的浓度均为作用浓度。3．试验温度为25℃±2℃ 4讨论 孢的杀灭率均为99．99％。很显然，无论是热力，还是化学消毒剂在相同条件下，对TSA和营养琼脂培 养的枯草杆菌黑色变种芽胞的杀灭效果均无显著差异，可以说两种培养基培养的枯草杆菌黑色变种芽 胞在抗力上无明显的差异。芽孢抵抗外界环境的抗力与芽孢的结构密切相连，芽孢中的含水量、DPA (2，6一吡啶二羧酸)的含量、Ca离子的含量及芽孢壁的厚度是影响芽孢抗力的主要因素‘51，当两种培 养基培养的枯草杆菌黑色变种芽孢的含水