应用微切割技术对胃癌与浸润转移过程中TP53基因突变的研究.pdfVIP

Edueational ， book教胃集 应用微切割技术对胃癌及浸润转移过程中 TP53基因突变的研究 许晶虹，陈丽荣 浙江大学医学院附属第二医院病理科．浙江省杭州市，310009 的4种病灶，即原发灶、脉管内瘤栓、淋巴结转移灶、远处脏器转移及远处播散灶分别进行了TP53基因外显子5 内含子突变和5例缺失外，其余29例均为外显子的错义点突变。从突变类型看，以转换型突变为主，有24例 检测到相同位点的突变，但淋巴结转移灶却未检测到突变。结论：本组胃癌的TP53基因突变具有特征性的突变 谱：外显子8的突变率最高，主要的突变类型为CpG位点的G：CAtT的转换，突变热点为密码子282、273 突变除了原发灶和转移灶相一致以外，还存在原发灶有突变，而转移灶无突变。 【关键词】胃癌；激光显微切割；TP53基因；突变； 因表达和突变检测，阐明胃癌浸润转移过程中TP53基因突变的生物学意义。 一、材料和方法： 1．实验材料： 淋巴结转移62例，无淋巴结转移30例。新鲜手术标本经10％中性福尔马林固定，酒精脱水，石蜡包埋。 41,q 2．方法： 2．1制片过程 洗。室温下干燥，LMD切割备用。 2．2LMD免疫组织化学 使用AP—Fastred系统(En 分钟。用Fastred显色，显微镜下观察显色过程，蒸馏水终止。室温下干燥，备LMD用。 2．3组织化学染色 由0．1％甲基绿对各例石蜡切片染色0．5分钟。 2．4激光显微切割 同表达的区域)、淋巴管或血管内瘤栓、肿瘤淋巴结转移区域、肿瘤其它脏器转移及腹腔播散区域(如：肝、胰、 卵巢等)、正常胃粘膜腺体等。每个样本约5000个细胞至0．5ml离心管盖内。 2．5DNA制备 j 在含切割细胞的离心管盖内加入20出的DNA抽提液，50。C水浴过夜，煮沸8分钟终止反应。 2．6PCR TP53基因exon5—8 star DNA聚合酶(5U／lxl TaqTM 仪(Perkin 4℃保存。 2．7PCR产物检测 2000DNA Marker作为标志物。紫外投射仪上 各取配对标本10pdPCR产物，进行1．5％琼脂糖凝胶电泳，DL 观察、照相。 2．8SSCP 各取8pd XTBE作电泳 液，4℃恒温，100V恒压，2—3h。电泳结束后，即银染、制膜保存。 2．9DNA直接测序 Terminator CycleSequencingReady 对SSCP分析中发现谱带有异常样本再进行DNA序列分析，使用BigDyeTM Reaction(PerkinElmer公司)试剂盒在37／自动测序仪(PerkinElmer公司)进行测序。 2．10统计学分析 1．0for 采用SPSSl 学意义和有高度统计学意义。 Educationalbook教育集 -一、 结果 3．1LMD(图1) 301个。 3．2胃腺癌TP53exon5—8测序结果 ， 均为外显子的错义点突变。