纤维结合蛋白加速感染创面修复作用地研究.pdfVIP

纤维结合蛋白加速感染创面修复作用的研究 天津医院骨科研究所李秀兰 师宜健刘长明 徐瑾张杨赵春英侯亭 一、FN对成纤维细胞的调节作用 创伤修复最终是以成纤维细胞(FibroblastFBs)的增殖和胶原蛋白的合成完成的。 目前认为细胞因子对于调控FBS的功能活动起关键作用，FN则是控制这一作用的最重要的 因子之一。外用中药“偎脓长肉”作用机制的研究{正明，剖面脓液中FN的含量与创面修复 密切相关。为了进一步研究FN对FBS的调节作用，本实验直接从创面获取肉芽组织，采用 体外无血清培养体系，3H一胸腺嘧啶和轴一脯氨酸掺入的方法，从FBS细胞DNA和蛋白质水 平研究不同浓度的外源性FN对FBS增殖和胶原蛋白合成的影响，探讨FN对刨伤修复的作 用机制。 1．材料 1．1实验动物，纯种同窝大耳白兔，健康，体重1．50一1．75k 京中国原子能研究院)。 1．3主要仪器，液闲仪(Becj(Ⅲann，Ls-9800)， 倒置显微镜(01yIⅡpus：I劬，coz培养箱 (NU一2500E)，超净工作台(天津医疗设各厂) 2．方法 2．1创面FBS的分离和培养 经2％普鲁卡因局麻，在实验家兔的腰背部傲双侧直径为3∞的圆形创面，深至肌膜， 清除表皮和皮下结缔组织，敷凡士林油纱，包扎伤口。3—5天后在无菌条件下，取新生肉 芽组织。经加有青、链霉素的H棚c’s液冲洗，修剪成lⅢ，大小，接种于培养瓶内，反转培 养瓶加入培养液，使组织块不接触培养液，以利于贴璧。放入5％co：培养箱，37℃培养2 小时后，反转培养，使组织块浸入培养液。培养卜2天后F踞开始从组织块长出。3—5天后 迅速增殖。7—10天可铺满瓶底。以O．25％咦蛋白酶消化传代，1：2分种。每周换液2次， 第3代后FBs纯度可达95％以上，本实验采用4—5代细胞。 2．2同位素掺入测定FN对FBS的影响 0x105细胞／ⅢlFBS悬液加入24孔培养板，每孔加 实验细胞采用无血清培养液培养．1l FN溶液200ul，对照组加2∞nl1640培养液，同时每孔加 浓度为10，20，30，50ug／ml 入3}I—胸腺睦啶0．25uci，继续培养24小时后将细胞收集在玻璃纤维素薄膜上，经磷酸缓 冲液冲洗后，80℃烘干。甩液闪仪测定3H一胸艨嘧睫掺入F醛细胞Dm合成期的量，检测FN 对FBS细胞增殖作用的影响。 以同样方法于培养孔中加入3H一脯氨酸0．5uci／孔．继续培养24小时后用玻璃纤维素 薄膜收集，经磷酸缓冲液冲洗，80℃烘干，用液闲仪测定3H一脯氨酸掺入FBS细胞胶原虽 自合成的量，以检测FN对FBS细胞胶原蛋白合成的影响。 次重复实验，实验数据采用成组t检验统计分析方法，检测单位c硼 3，结果 3．1FN对FBS细胞增殖的调节作用 体外培养的FBS细胞加入FN后3H一胸腺嘧啶的掺入量明显升高．表明FN对F晖细胞 增殖有明显的促进作用。不同浓度的FN对FBS细胞增殖作用的强弱有所差异。其高峰期在 硎lO一20ug／Ⅲ1浓度之间，当继续增加FN浓度时FBs细胞增殖无继续增加且有所下降，但 与对照组比较均有显著性差异。表明FN对FBS细胞增殖有良好的量效调节作用． 3．2 FN对腔原蛋白合成的调节作用 培养的FBS细胞经FN处理后，3H一脯氨酸的掺入量与对照组比较呈极显著性差异，表 明刖对．FBs胶原舍成有明显的促进作用。显示FNloug／Ⅲ1即出现3H一脯氨酸的掺入蠢堰加， 达2蝴】时出现掺入高峰。提示外源刖可加速FBs细胞胶原蛋白合成作用，且具有明显 的量效关系． 讨论 刨伤修复是机体完成自我修复的一个极其复杂的生理过程，FN在这一过程中发挥着重 要作用。它参与细胞粘附，促进细胞移动，调理吞噬，介导细胞分化．其中对FBs细胞的 调控作用则是影响刨伤修复进程的关键。FN对FBS细胞的调控作用是有一定规律性的，刨 伤后血小板聚集，血凝块形成，FN迅速与纤维蛋白和血凝块桥联起来，形成细胞能够新生 的基质“网架”，引导FBS细胞、巨噬细胞、内皮细胞定位、增殖和分泌活性物质．创伤6 天后FN迅速增加，FBs开始合成胶原蛋白，14天FBs细胞迅逮增殖并合成大量胶原蛋白， 以填充伤口，并引起创面迅速收缩。以后进入胶原蛋白的改建阶段，FN逐渐鞘失，FBS细 胞增殖和胶原蛋白合成迅速下降。可见在创面修复早