ELISA法测定脾虚型重症肌无力患者外周血白细胞介素2受体地研究.pdfVIP

ELISA法测定脾虚型重症肌无力患者 外周血白细胞介素2受体的研究 张世平 广州市集贤医学研究所神经肌肉疾病研究室 (广州510180) 人白细胞介索2受体(Interleukjn2rec印tor，I】。一2R)是存在于多种细胞表砸上的糖 蛋白，在白细胞介豢2(IL一2)发挥生物学效应上起着关键性的作用，IL一2只有与IL一 2R结合并相互作用，才能引起细胞的增殖，发挥免疫效应。目前已了解到，lL～2R表达 异常与多种肿瘤、自身免疫性疾病、某些感染等有关“j。鉴于重症肌无力(MG)是一种典 型的自身免痤性疾病。而且国内外迄今尚无关于MG患者外周血IL一2R的研究报告，笔 者首次应用单克隆抗体Wulrac对此进行研究，目的在于了解脾虚型MG外周血IL一2R 的水平，探讨导致脾虚型重症肌无力免疫功能紊乱的原因，为深入研究MG的辨证论治 及其疗效机理打下基础。 材料和方法 1．病例来源 MG患者40例，其中本院专科门诊30例，本院内二、针灸科住院病人 10倒。男9例，女3l例，年龄9—57岁，病程3个月一11年。 2．辨证分型 按87年2月国家“七五”攻关课题中医科研协作组上海会议脾虚临床 组制定的标准进行辨证分型12J，本组40例均属脾气虚。 3．临床分型 接86年9月全国首届肌病及周围神经病学术座谈会制定的“肌肉疾 病”b】并参考改良的(h口mall分类。本组病人I型5例、Ⅱa型：；例、Ⅱb型9例、m型 10例、Ⅳ型5倒、少年型6例。 4．抗IL一2R的单克隆抗体wul、ac，购自卫生部武汉生物制品研究所，批号890l。 能识别人II·—．2R，为IgGl类单克隆抗体，已经第三次国际人自细胞分化抗原会议认 可为∞25，相当于，Ijc。 5．辣根过氧化物酶标记葡萄球菌蛋白A(}玎婶一SPA)，购自武汉生物制品研究所。 能与单抗的F(：段结合，供ELISA用。 6．其他试剂均为国产分析纯或化学纯试剂。 7．主要仪器DC一3022型酶联免疫测定仪，南京华东电子厂出品，该机带有自动打 印系统。 ·76· 8．实验方法 巴细胞层。PBS洗涤，共2次，取沉渣加Terasaki液悬浮。 4℃冰箱中过夜。 (4)洗涤三次(以下每加下一步试剂，均先洗涤三次)。 (5)加1％BsA，每孔200uI，37℃×1h。 (6)加淋巴细胞悬液，每标本双份对照，每孔200ul，37℃×lh。 (7)}Ⅱ啦一SPA按l：100用PBS稀释，每孔200ul，37℃×1h。 应，每孔50ul。 (9)用I](卜3022型酶联免疫测定仪测各孔的oD值，测量波长490nm。 9．统计方法，采用t检验。 实 验 结 果 部为阴性。40例MG患者中，阳性”例，阳性率67．5％，与正常对照组比较两者差异有 非常显著的统计学意义。(见表一) 表一正常人与MG患者外周血IL一2R比较 正常值上限X±3疆)=O．06+3×014=0．48 OD0．48为阳性 2．临床分型与外周血IL一2R水平的关系 分析本实验各桩床分型的II．·之R水平，发现成人Ⅲ型的外周血IL一2R水平最高， 其次为Ⅱb型、Ⅱa型，少年型IL一2R水乎最低。经统计学处理，成人Ⅲ型与其他各型的 差异有显著性意义，成人Ⅱb型与少年型的差异也有显著性意义，其余各型之间差异无显 著性意义。各型之间IL一2R水平比较见表二。 ·77· 表二MG临床分型与外周血lL一2R水平的比较 注：Ⅲ：I、Ⅲ：Ⅱa、Ⅲ：Ⅳ、Ⅲ：少年型的P值均小于O．01。 m：ⅡbP0．05．Ⅱb：少年型P0．05。 讨 论 近年来对淋巴细胞因子的深入研究表明uJ，白细胞介素2(IL一2)在免疫反应中起着 中心调节作用，但是IL一2只有同淋巴细胞膜上的特异受体IL一2R相结合，才能发挥其 促进细胞增殖生长的生物活性。因此，研究IL一2R如同研究II．一2一样，对于深入了解 机体的免疫调节和疾病状态下免疫调节的异常，