郏县红牛CLPG基因PCR-SSCP的研究.pdfVIP

412 第十次全国畜禽遗传标记研讨会论文集 郏县红牛CLPG基因PCR--SSCP研究‘ 陈付英1，陈宏1，一，王新庄3，牛晖3，王居强3，王轶敏3 (1．西北农林科技大学动物科技学院，陕西省农业分子生物学重点实验室，陕西杨凌，712100；2．徐 州师范大学细胞与分子生物学研究所，江苏徐州．221116；3．河南省肉牛工程技术研究中心，郑州 ．450003) 摘要：本文利用PCR-SSCP技术时113头郏县红牛CLPG基因的多态性进行了分析。发现 有三个等住基因^、B，C，他们的基因频率分别为0．8673，0．0619和0．0708．但发现从、AB 衡状态． 关键词：郏县红牛；PCR—SSCP；CLPGgene；Polymorphism 郏县红牛是我国八大良种黄牛之一，主产于河南省平顶山市的郏县、宝丰县、鲁山县，汝州市、禹 州市、襄城县等县(市、区)亦有分布。当地农民采用放牧与舍饲相结合的饲养方式，经过长期的培育， 形成现在的郏县红牛。郏县红牛耐粗饲，抗逆性好，遗传性能稳定。与其他黄牛品种相比，体躯长度发 育较好，后躯肌肉丰满，肉质鲜嫩，大理石纹状明显等优点，向肉用方向发展的潜力很大。 在绵羊上，CLPG基因是影响肌肉过度肥大表型的主效基因“1，主要表型特征为后臀极度发育，这种 表型被称为双肌臀，根据表型将该基因命名为Callipyge基因，用符号cu毪菱示。该性状是由常染色体上 的正常基因发生突变所致，而且该突变基因以父本来源的等位基因对其表型效应具有影响，这种遗传方式 称为“极性超显性”2”。 本研究对郏县红牛cLPG基因的多态性进行研究，以寻找cLPG基因的不同类型与郏县红牛发育性状间 的关系，为郏县红牛的选种选育提供理论依据。 1材料和方法 1．1试验材料 113头邦县红牛血样采自河南省平顶山市郏县红牛的保种区，颈静脉采血，加0．2％肝素抗凝，低温 运回实验室一80℃保存。血样基因组DNA的提取参照H．Chen[41的方法。 1．2PCR扩增引物 7一TGAAAA 参考GenBank绵羊cLPG基因的序列(登录号AF401294)设计引物，引物序列为：上游引物：5 GAcGGTTAA-3 bp。 CGTGAAOCcAGAAGC一3’下游引物：5’-GGCAGGAGA7，扩增的目的片段长度为493 引物由上海生工生物工程公司合成。 1．3PeR反应条件 n101／L) mol／L1．59L，dNTP(2．5 25止反应体系组分：10Xbuffer(不含M矿+)为2，5皿，20 2．0皿、TaqDNA聚合酶(2．5U／山)0．3此，混合引物(上游引物和下游引物各为lOpmol／灿)为0．5 皿，模板DNA(50ng／灿)为1．0皿，加水至25灿； min，(94℃变性40s，55．7℃复性30s，72C延伸45s)，35个循 PcR反应程序：94。C预变性4．0 奉基金项目：河南省杰出人才创新基金(0521001900)和西北农林科技大学拔尖八才基金资助。 作者简介：陈付英(1973--)，女，河南南阳人，在读硕士研究生，研究方向：生物技术与动物育种 Animal Bulletin 413 Biotechnology 环，最后72℃延伸i0min，4℃保存。产物用1％琼脂糖凝胶检测。 1．4PCR产物检洲、变性及PAGE．SSCP的图t-冀r*t nmaol／LEDTA(pH 状态。样品在10％变性聚丙烯酰胺凝胶中电泳，电泳缓冲液为lxTBE，180V电压室温电泳18h。电泳结 束后，进行银染显带并记录结果。 2结果和分析 2．1 CLPG基因的PCR产物的电津检测