无试剂绒毛膜促性腺激素免疫传感器的研究.pdfVIP

V01．22 第22卷增刊 分析试验室 Suppl Chinese of 2003—11 2003年11月 Journal Laboratory Analysis 无试剂绒毛膜促性腺激素免疫传感器研究 陈进1，，严枫2，戴宗1，鞠煜先¨ (1．南京大学化学系，南京210093；2．江苏省肿瘤医院，南京210009) 摘要：通过Tio溶胶凝胶气相沉积法将绒毛膜促性腺激素(HCG)固定在玻碳 电极表面。利用m讲标记HCG抗体，采用竞争免疫反应，通过HRP在电极表面 的直接电化学，测定人血清中HCG抗原的含量，发展新型的HCG免疫传感器。 该传感器制备方便，性能稳定，可大大缩短分析时间，减少样品用量，在临床应用 上有良好的前景。 关键词：免疫传感器；HCG；免疫分析；直接电化学；玻碳电极 HCG(绒毛膜促性腺激素)是一种水溶性糖蛋1．2 HCG免疫传感器制备 白。分子质量为37kDa，它是孕妇怀孕期间由胎盘 玻碳电极(直径约为5 滋养层合成的第一个糖蛋白。滋养层肿瘤和大量 砂纸、Al’O，悬浊液抛光至镜面，用二次水超声处理 非滋养层肿瘤也分泌该物质。测量人体血清和尿 mol／L 5．0 后，采用电化学方法预处理，先在0．1 pH 中的HCG含量对妇女妊娠的早期诊断具有重要意 V电位下氧化300s， 的PBS中将玻碳电极在1．75 V和0．3～一I．3V之问 义，并可用于现代免疫怀孕测试和各种胚胎滋养层 再将电极分别在0．3一I．3 疾病的控制。 分别循环扫描30圈至稳定。氮气吹干电极备用。 近年来，由于电化学免疫分析法成功地将免疫 1．3免疫分析过程 反应的高选择性和电化学测定的高灵敏度相结合 而越来越受到人们的重视。其测定灵敏度与放射 面，放人盛有异丙氧基钛的锥形瓶中，在30c|C气相 免疫法相近而不需使用放射性同位素，充分显示了 沉积60 它在临床检测中的优越性和发展前途。本文利用 胶凝胶表面，将该电极浸入含有待测HCG抗原和 Ti02溶胶凝胶良好的生物相容性，通过气相沉积 min，用 适量HRP标记HCG抗体的溶液中温育50 法将HCG抗原固定在玻碳电极表面，利用竞争免 二次水清洗后利用HRP的直接电化学采用示差脉 疫分析方法和辣根过氧化酶标记HCG抗体的直接 冲法进行测定。所有实验溶液均经高纯氮气通氮 电化学，发展新型的HCG免疫传感器。 除氧5min。 1实验部分 2结果与讨论 1．1试剂与仪器 2．1二氧化钛修饰膜的表面性质 HCG检测试剂盒，牛血清白蛋白(BSA)，钛酸 电极表面的二