蛇神经毒素纯品生物活性地研究.pdfVIP

但是，嗳收后蛋白质在血液中的分布仍需研究，尤其粘膜吸附颗粒可能被阿织一内皮系统(retieulo—e11． dothelial system)快速清除。或吸附到血管内皮细胞，或与血细胞整联蛋白相互作用等影响吸收效率的因素。 erJhalaceas) 6吸收促进剂lAbsorption 嗳收促进剂主要是扰乱内吞细胞膜来增加上皮细胞的渗透性，而且诱导上皮细胞间的紧密连接开放，另 外，一些促进剂可能也起蛋白质抑制剂的作用，降低粘膜层的粘度等等来提高蛋白质的吸收。 因为吸收促进荆并非对蛋白质有特异性，可能存在风险，另外，如螯合剂、一些胆汁盐和不同的表面括性 剂等会导致局部发炎，长期会损伤粘膜，一些副作用较少的温和的促进剂如脱己酰壳多糖、乙酰肉碱等显得 更安全一些。研究表明，多个吸收促进剂结合使用比单个成分更有效。 最近，一类新的吸收促进剂引起了广泛的关注，这就是能修饰小肠上皮细胞紧密连接的物质。通过小肠 上皮细胞之问的紧密连接给药是一种很好的途径，而吸收促进剂往往还使细胞膜扰动，很多可能会导致细胞 occeludens 膜不可逆的损伤。而紧密连接毒素(Zonula toxint，ZOT)和不同的Pz均被证实，能引起细胞间空 倍，而使IgG(140000～160000)在空肠和回肠的吸收分别提高2倍和6倍。 而且，ZOT还具有以下的优点使其具有广泛的应用前景：①ZOT无细胞毒性，不影响小肠上皮细胞。② 在小肠上皮许可的范围内通过特殊的受体作用扰动。@对大肠部分不起作用，这样结肠的微生物区的潜在 危害可以消除，口服也不会产生急性毒副作用。 7结语 这些年来，口服给药进行了多方面的研究，也取得了许多进展，虽然目前口服的有效性只达到10％左 右，考虑到胃肠道其固有的吸收阻力，其口服有效率达到20％--30％是完全可能的。研究表明，各种方法需 要相互协调作用，新近的紧密连接毒素ZOT的研制与开发因为对粘膜副作用小，且跨过了溶酶体的降解而 具有探远的意义。但尚有许多工作待做。 我们可以预计，1：3服蛋白质类生物大分子药物的研究将会吸引更多研究者关注的目光。距离使用口服这 一手殷也将越来越近。 蛇神经毒素纯品生物活性的研究 刘华清1，2叶迅1肖齐世3李荣秀3翁恩琪2王霆1 (1上海市转基因研究中。上海201300； 2率东师范大学环境科学与技术系 上海200062；3中国科学院上海生物工程研究中o) 蛇毒是由蛇的毒腺分泌的多种组分构成的复杂混合物，其中90％以上是蛋白质。近年来随着生化技术 的发展，多种蛇神经毒素成分已经得到分离纯化。找们研制的神经毒素的亲和分离工艺．经济、简单、更适合 工业化生产，已获得蛇神经毒素纯品，其特征为相对分子质量约为6800，等电点9．3。本纯化工艺稳定实验 室小试已获得百nag级水平纯品蛇毒，纯度97％。为有效控制蛇毒经毒素纯品的药品质量，我们对其进行了 作为新药开发所需舶部分有关理化性质及生物学话性的研究。 1实验材料 供(批号。盐酸吗啡、蛇毒、神经毒紊和戊巴比妥钠均在临用前用0．9％氯化钠溶液配制成溶液。 多肽凝胶、电泳贮液：舢ryl一Bis(T=49．5％，C=3％)，Gel 阴极缓冲液(0．2tool·L-。Tris—HCI 10ml，澳 1014 ：r一…’gj蓬 余试剂均购自上海生工生物工程有限公司。 1．2实验动物：昆明种小鼠，体重18--229，购自中国科学院上海实验动物中心，实验动物证号：中科沪动曾 D99004。在本中心实验动物房饲以标准饲料、自由给水，环境适应lm3天后开始实验。 2实验方法 + 2．1多肽凝胶电泳 按配方所给数据灌好胶，装配好电泳装置(电泳仪：Biorad 阳极电泳缓冲液。根据样品的大概浓度取相应体积的样品(0．5～5pg)，加入等体积的上样缓冲液，于沸水中 煮3～5min，中间间或振荡一下。样品拿出后置室温下冷却，离心后上样。电泳以恒压状态下进行，0～ 用凝胶成像系统(美国PE公司)成像并进行数据处理，