灵芝孢子的体外抗肿瘤活性的研究.pdfVIP

醇(8：2)洗脱及Sephadex 分(479)经硅胶柱层析，氯仿一甲醇(9：1)洗脱部分经Sepbadex 从茶多酚中分离提取表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)的研究 杨文英 胡晓_壬君(核．37-业北京化工冶金研究院101149) I 茶：多酚是存在于茶叶中的多羟基酚性化合物的混合物，占茶干基的20—30％。茶多酚是一种天然抗氧 化剂，其茶多酚的主要组分是儿茶素，占荣多酚重量的60％～80％左右。主要的几种儿茶素有(一)一表儿 儿茶素没食子酸酯(L—EGCG)。它们的基本结构为2一邻苯酚基苯并吡喃衍生物，正由于结构中具有邻苯 酚基，作为抗氧化剂的活性就高于一般非酚性或单酚羟基类抗氧化剂。其中，表没食子儿茶素没食子酸酯 (EGCC)的抗氧化能力最强，是茶多酚中儿茶素的主要活性成分。 表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)是茶多酚中儿茶素的主要活性成分，具有很强的抗氧化性和消除自 由基的能力，具有抗血栓、抗辐射、抗衰老、抗癌等药理功能，可用于做抗癌和抗心血管疾病的新药。分离提 取茶多酚中的EGCG，有利于充分利用生理活性成分，已成为茶叶界和医学界研究的热点。 儿茶素单体的化学结构和性质相近，采用～般方法很难分离，分离制备儿茶素单体的方法，主要是各种 层析分离技术。目前，国内外对茶多酚中儿茶素单体的分离提取取得了一定结果．但生产规模较小，随着医 学的发展，EGCG的需求量会不断增加．寻求EGCG大规模的工业化生产越来越显得重要。 本文采用高效液相制备色谱法从茶多酚中分离儿茶素单体表没食子jL茶素没食子酸酯，采用乙醇一水 淋洗体系获得了较好的分离结果。通过对茶多酚进行一级分离，可将EGCG与茶多酚中其他组分分开，获得 件温和，不会破坏茶多酚内所有成分的隹物活性，同时，也不会导致环境污染．有机溶剂可回收利用，有可能 进行工业化生产。(参考文献略) 灵芝孢子的体外抗肿瘤活性研究 杨新林赵东旭王利波 陈霖 王帮武 朱鹤孙 (北京理工大学材料科学研究中心 100081) 徐建兰 (中国无锡三联高科技开发公司 214021) 近年来，随着灵芝人工栽培技术的发展，规模收集其生殖细胞——灵芝孢子的难题得到解决，逐步开展了 对灵芝孢子的研究，对其成分分析、药理作用和临床应用取得了一些进展。但以往研究采用原料均为不破壁孢 子粉。最近我们较好地解决r孢子破壁这一难题，并对破壁与不破壁孢子进行了一些初步的比较研究。本文 以破壁灵芝孢子为原料，首次初步探讨了其乙醇提取液对人宫颈上皮癌HeLa细胞生长的作用及机理。 1材料与方法 )．1 灵芝孢子提取液的制备 公司提供，破壁率98％以上)，加入乙醇浸提3次，每次均在30％摇床上振荡浸提9～lOh，合并3次浸提液并 度)为49／ml。将10mlGLSE．上硅胶柱层析，依次氯仿、乙酸乙酯、甲醇洗脱，乙酸乙酯部分浓缩蒸干，得到膏 716 状物2419．用10ml乙醇将其溶解，即为(：I spj．其相对浓度(原料浓度)也是49／m1． 开发公司提供)浸提3次后，将3次浸提液台并后蒸_f．用乙醇溶解使其丰H对浓度为4#，ml，即为GLSE，样品。 l 2染料排斥试轮 HeLa细咆援种丁4扎培养扳叶·，用不同浓度待j她样品处理，并且用含1％乙醇的培养液作对照，每一个 浓度处理组和对照组均做4个重复，然后置于c0二培养箱中继续培养48h。消化细胞，吹打成为单个分散的 细胞数目．f1算活细胞率与样品的半致死剂量fI．n。、) I．3时阐作片1曲线 别用血球计数板计数，以活细胞数的对数与叫闻作圈即可得到时间作Hj曲线：汁算样品的杀伤率(R。)以及 样品对倍增时间(T。)、生长饱和密度(N、)的影响 l 4Ⅵ7rr测定 测量580nnt处的光吸收值，数据进行统汁学碌著陛分析汁算细胞的存活率【T／C)以及样品的Ic。值：T／C 品浓度即Ic。 1 5细胞周期母下斤一流式细袍光腰术 置于冰巾5rain以停止RNA酶的作用，加入磺化丙啶 (终浓度为lOlLg／m1)(美闰SIGMA)公司处理30。“Ⅲi“ Becton Oickinsotz公司)进行检测(上述每一步骤都要求保持细胞