用羰基铁粉富集CD34-%27%2b-造血干%2f祖细胞地研究.pdfVIP

在细胞免疫功能紊乱方面可能不存在程度上差异。 认为与异常有关的CTL增高及活化，是造成造血功能异常主要原因，AA患儿CTL不仅可以直 接．而且可以通过淋巴园子：IFN．rr、TNF．q、IL．2等造血负调节因子抑制正常粒一巨噬细胞 即具有针对免疫活性T淋巴细胞抑制细胞介导免疫的功能特异性，能降低CDs+细胞数量，解除 CTL对骨髓造血抑制作用。 总之．从患儿外周血T细胞亚群出现CDs+细胞升高CD4*／CDg+比值下隆，可能为导致骨髓 造血功能障碍的主要发病机制：对临床正确选用免疫抑制治疗AA患儿有一定的指导意义。 用羰基铁粉富集CD34+造血干／祖细胞的研究 浙江大学医学院附属儿童医院血液科(310003) 浙江省嘉兴市第一医院儿科(314000) 汤永民孙飞钱柏芹沈红强宋华杨世隆石淑文徐卫群 国外研究表明，移植前对移植物进行CD34+细胞选择，不仅可以宫集干，祖细胞，便于贮藏， 减少输入容积，而且可以减少二甲基亚砜和细胞溶解产物的量，在骨髓移植中这些量的减少有助 于降低心血管的毒副作用。 羰基铁粉(carbonyliron，CI)是一种有机铁制剂，其来源方便，价格便宜，可高温无菌处理， 且从标本中去除的方法简便快速，曾被用作分离吞噬细胞的材料。由于造血组织中含有的单核细 胞及粒细胞具有吞噬功能，而CD34+细胞却无吞噬功能，因此，可能可以用羰基铁粉来富集 CD34+细胞，以减小移植物容积，有关这方面的工作国内外未见系列报道。本研究采用了CI富 下。 材料与方法 1．骨髓单个核细胞(BMMNC)分离 BM取自本院缓解期停化疗2周以上白血病患者的胸骨，以肝素抗凝，用淋巴细胞分离液(相 养液(购自美国Sigma公司)洗涤2次，制成细胞悬液． 2．外周血干细胞(PBSC)冻融分离 将PBSC从液氮罐内取出后立即置37(2水浴温箱内快速融解，加入DNA酶共同孵育以裂解 死细胞释放的DNA，再用淋巴细胞分离液分离弃去底层死细胞．收获界面层细胞，经台盼蓝计 124 数，细胞存活率95％者用于实验。 3．CD34+细胞的富集 取2×10 将试管壁一侧置高能量磁铁边，使吞噬有铁粉的单核细胞和粒细胞及游离的铁粉被吸至试管壁 上．吸出无铁粉的细胞悬液以回收无铁粉细胞。将有铁粉的细胞重新悬浮，重复上述操作2次以 充分回收细胞。 - 4．CD34+细胞的测定 基本按文献报道的方法进行。将富集前及富集后细胞各取5×105细胞加入PerCP．CD45或 PE·mouse u IgGI各lO 获取60000个细胞，咀减少CD34+细胞测定的误差。 5．各种观察指标的计算方法 CD34+％=实际测得阳性颗粒÷有核细胞总数×100％ CD34+细胞富集倍数=选择后阳性部分CD34+％÷选择前CD34÷％ 100％ 总细胞回收率=选择后有核细胞总数÷选择前有拔细胞总数X 数)×100％。 6．统计学方法：数据采用x±S表示．统计处理用t检验。 结果 I．FCM评价富集前后的BMMNC或PBSC中CD34=细胞纯度(图1、图2) 2．采用cf共处理了II例病人的8M标本，富集前后结果见表I。 CD34+细胞含量富集前(2．27±2．13％)，富集后明显升高(4．00+329)％(Po．01)；富集倍 3．o)％ (100％)相比，差异无显著意义(P0．05)。 3．采用cI共处理了lO例病人的PBSC标本，富集前后结果见表2。 01)；富集 相比，差异无显著意义(P0．05)。 4．BM组与PBSC组的比较见表3。 无论是富集倍数、总细胞回收率还是CD34+细胞回收率两组间均无显著性差异。 讨论 CD34抗原是造血干，祖细胞的标志，利用CD34+细胞移植给致死性骨髓清除性治