人神经生长因子对低氧环境下离体鸡胚前脑神经细胞生长影响地研究.pdfVIP

人神经生长因子对低氧环境下离体鸡胚 前脑神经细胞生长影响的研究 章建程殷 明 林云胡家庆丛颖刘忠权 (上海海军医学研究所) 一、引 言 多年来，不断有长航艇员记忆力减退、反应迟缓的临床病例。经检测发现，水面舰艇、 潜艇、核潜艇的密闭大舱，氧气的缺乏是最直接也是最重要的因素。据报道，缺氧条件下培 养的鸡胚前脑神经细胞体出现衰退和变性现象，且这种变化呈不可逆性…。另报道，神经 细胞和胶质细胞混合培养时，缺氧损害会减轻，星状胶质细胞含有丰富的糖原，网此胶质 细胞由可能通过提供糖原来减轻神经细胞缺氧损伤”j。 近年来研究表明，内源性生物活性因子对脑损伤的作用值得重视。人神经生长凶子 (humannerve factor,hNGF)具有促交感、感觉神经细胞。前脑基底核胆碱能神经 growth 的存活及突起伸长作用，与机体防御机能相关，不仅对正常神经细胞有营养作用，而且在 神经系统发育和正常生理功能维持及神经损伤修复中起重要作用‘…。到目前为LL，尚未见 NGF对低氧环境下培养的神经细胞作用影响的文献报道。鉴于内源性因子与一般药物相比， 在效用和减少毒副作用方面有其优越性。因此，本研究通过体外神经细胞低氧模型的建立， 观察在无胶质细胞条件下hNGF对抗低氧所致神经细胞损害的作用，旨在进一步证实神经 营养闭子的抗脑缺氧作用，为应用神经营养因子防治缺氧损伤提供实验依据。 二、研究方法 1神经细胞培养 在无菌条件F分离8d龄SK III鸡胚前脑，去脑膜后切成小块，以0．1％胰蛋白酶消化 (35。C，30 min)成分散的悬液细胞。细胞接种在预涂多聚赖氨酸的24孔培养板内。培养 mL 液为：{％小牛血清和400mg／100d．D葡萄糖的MEM(Gibco)。细胞接种浓度和培养液 体积是每孔0A×106细胞加．5mL。标本在370C，5％C02培养箱内预培养20h。按此方法可 获得较纯的神经细胞培养标本i”。 互实验分组 分为三组：①低氧组，系标本置于1L的密闭容器内，通低氧气体(5％02，5％CO，， 90％N2)，流量20mL／min。②实验组，系在培养液中不JJld,牛血清，以10hNGF代之， ng 实验条件同低氧组。③对照组，系标本置于95％空气和5％C02培养箱内。 2／4 3实验方法 将神经细胞预培养后换新鲜培养液。然后置于实验条件下培养一定时间后，在硅微镜 下观察神经细胞生长状况、进行神经细胞计数。 4统计学处理 在Pc机上利用SPSSWin9．0统计软件进行数据分析。 三、结 果 经20 h常氧下预培养后，可见接种的细胞已贴壁，部分长出细的突起，表明生长状况 良好(见276页图1A)。常氧下继续培养至48h后，细胞聚集成簇状，密集的突起交织成 网(!^!．图276页1B)。但48h低氧处理下的神经细胞，可见其迁移停滞，胞体萎缩，表面 有空泡及碎片较多等衰退和变性现象(见260页图1C)。同时，我们观察到，加入hNGF 表1人抻经生长因子对低董时神经细胞存活的影响 }q检验P005，·+t检验PO．Ol 蛋白、处于低氧环境下生长的鸡胚前脑神经细胞仍见有交织成网的密集突起(见260页图 h，48 ID)。对照组、低氧组及低氧加hNGF组在培养24h后的存活神经细胞计数见表1。 h， 由表1可见在加入10nghNGF蛋白组，鸡胚前脑神经细胞在低氧环境下生长良好，在24 48h与对照组标本间的细胞存活数比较无明显差异(PO．05)，与单纯低氧条件下培养的 鸡胚前脑神经细胞存活数比较在24