免疫核糖核酸对荷瘤小鼠特异性主动抗瘤作用地研究.pdfVIP

免疫核糖核酸对荷瘤小鼠特异性主动抗瘤作用的研究 郑晓霞李靖宋淑霞韩丽枝侯洁 吕占军 (河北医科大学实验动物中心石家庄050017) 摘要目的比较抗1t22，S180两种免疫核糖核酸(iRNA)的特异性抗肿瘤作用。方 法：用白细胞粘附抑制实验(LAI)检测免疫核糖核酸生物活性。用抗H22，$180两种免疫核糖 核酸治疗荷H22小鼠．观察小鼠的肿瘤体积，抑瘤率，用MIT法检测小鼠脾脏淋巴细胞增殖活 性、NK细胞活性，腹腔M叩细胞活性。以不同给药时闻观察小鼠平均生存天数、生命延长率。 结果：抗H22iRNA组的肿瘤体积及抑瘤率、脾脏淋巴细胞增殖括性、NK细胞杀靶活性、M啦细胞 吞噬功能与其它组比较均有显著差异(P0．们)，抗SIS0iRNA组与对照组也有差别(P0． 05)，早期应用抗H22iRNA组与对照组之间也具有统计学意义(P(0．01)。结论：白细胞粘附抑 制实验结合MFI法可以证明iRNA具有传递细胞免疫活性的特异性。特异性免疫核糖核酸携 带免疫信息，可以在不同种属动物间传递免疫活性，使正常动物或细胞获得免疫功能，其效应要 优于非特异性免疫核糖核酸。肿瘤发生后应尽早采用iRNA治疗可以延长小鼠生存期，维持小 鼠免疫功能，增加抗肿瘤能力。 关键词肿瘤生物治疗免疫核糖核酸白细胞粘附抑制实验 前 言 免疫核糖核酸，简称iRNA是来自致敏动物的淋巴细胞、淋巴组织(胸腺、淋巴结、脾脏 等)能够传递该动物免疫力的核糖核酸。由于iRNA具有超越种属界限免疫功能的特点，多 年来有关它的基础和应用方面的研究始终受到重视，70年代后iRNA作为一种新的特异免 疫制剂治疗肿瘤、某些传染病收到一定效果，显示出它的免疫潜能和作用…。iRNA作为一 种免疫制剂，能够将供者所具有的特异性免疫应答能力传递给受体的机体或淋巴细胞…。 特异性免疫核糖核酸与非特异性免疫核糖核酸是否具有相同的抗肿瘤效应仍需进一步研 究。 材料和方法 1实验动物和肿瘤细胞株：正常雄性SD大鼠，4—6周龄昆明小鼠，合格证号：冀医动管字 第040056号，河北医科大学实验动物学部提供。H22，S180细胞株由本实验室液氮保存。 于德国Sigma公司。ZF-90型多功能暗箱式紫外投射仪由上海顾村电光仪器厂出品。水浴 震荡器购于上通仪表公司。 3瘤苗的制备：按文献悼o】，热休克处理，丝裂霉素灭能，细胞浓度调为2×108+／ml。 4免疫大鼠：上述制备好的两株瘤苗加佐剂自大鼠腹腔注射，每次问隔1周，共3次，末次 注射后7天处死，收集淋巴结、肝、脾、胸腺等。 5免疫核糖核酸iRNA的提取：按文献”1用热酚法分别抽提两种iRNA，抽提后的iRNA按 生物制品法鉴定常规做无菌、热原、毒性实验合格后，-30。C保存备用。同法自未免疫大鼠淋 巴组织中提取正常RNA(nRNA)做为对照。 6 MTY-LAI法检测iRNA生物括性 ·38· 6·1小鼠脾细胞制备：取昆明种小鼠脾细胞，以淋巴细胞分离液分离单个核细胞，调细胞浓 度为2×106／ml。 6．2 I-122瘤细胞抗原的制备：将H22细胞调整浓度为3×107个／IIll。反复动融3次，高速 离心10rain，取上清1：5稀释备用”J。 6．3 MTr-LAI步骤：按文献”o在96孔细胞培养板上每孔加脾细胞100ul，H22瘤细胞抗原 粘附率=[A空白(对照、实验)／A总]x100％粘附抑制指数=(1一对照或实验粘附率／空 白粘附率)×100％ 7动物实验 7．1动物分组：将100只18±lg昆明小鼠分成两批。 组，D正常nRNA组。小鼠在瘤细胞攻击前2天和攻击当天，每只每天1次用iRNA2．0mg／ 0．2ml进行右前肢腋下注射，连续3次，盐水组注同体积生理盐水”41。然后于各组小鼠右 前肢皮下用2×106-i-／o．2ml／只的H22肿瘤细胞攻击。此后每隔1天给药，共5次。从接 种第4天卡尺每日测肿瘤体积，描绘各组荷瘤小鼠肿瘤生长曲线，计算抑瘤率。抑瘤率= (I一实验组平均体移y对照组平均体积)×100％第11天脱颈处死动物，用w盯法分别测 小鼠脾脏淋巴细胞增殖活性、NK细胞活性、腹腔Mtp细胞吞噬能力。第二批60只，随机分 成三组，每组20只。A为对照组，注射生理盐水。B、C两组分别自1-122瘤细胞接种第1、5 天开始注射抗H22iRNA，每隔1天给药，共10次。接种瘤细胞及给药的方法和用量同前。 观察小鼠生存时间、平均生存天数并计算生命延长率。 7．2