超临界CO-%2c2-对不同培养条件下酵母菌生长状况影响地研究.pdfVIP

超临界cot对不同培养条件下酵母菌 生长状况影响的研究 钱俊青 王素娟 葛立军 (浙江工业大学生物与环境_r_程学院，中国杭州310014) 摘要 为将具有优良性能的超0界c仇作为生物转化的介质或用于在线苹取发酵产物消除付徽生物的 抑制，本文考察了超临界co,叶不同培养条件下徽生物生长的影响。以醉母菌为叶象，研究了不同扩 培阶段的酵毋与超临界co,接触后的生长状况，以及与超临界co,接触的酵母在不同培养条件下生长 状况。结果表明，超临界co,时酵母菌的生长有明显影响，主要表现为处理后的酵毋枪代谢与细胞生 长速率减慢，并随接触时间的不同有不同的变化，前期扩培时间越长影响越明显，提高培养沮度，可 在一定租度消除上迷形响。 关扭词 超临界co, 酵母生长 培养条件 影响 众所周知，超临界流体具有优良的溶剂性能，以超临界C02萃取发酵产物的研究已有较多 报道{’一’}。为进一步利用超临界CO,所具有的溶解选择性强，性能可随温度，压力调整，脱离发 酵体系方便等优点，特别是将超临界C02与发酵液共存作为生物转化的介质。以解决转化前体 溶解困难，转化过程传质慢及转化产物不能连续脱离体系等问题，或以超临界C02在线萃取发 酵产物，以消除产物积累对微生物生长的抑制，提高发酵生产的整体效益，使超临界流体在生 物化工领域能更广泛的应用。有关的基础性探索正在开展心一‘5，，其中的一项研究就是考察超临界 C02对微生物生长状况的影响，这方面的探索是超临界C02能否作为生物转化介质或在线萃取发 醉产物十分关键的基础，弄清这一基本规律对以后的研究有重要指导意义。本文选择了代谢途 径已十分清楚，培养条件也十分成熟的酒精酵母为研究对象，重点试验了不同扩培时间的酵母 与超临界CO,接触后对其生长状况的影响，以及经超临界C02处理后酵母在不同培养条件下的 生长状况，包括与超临界CO,共存下的生长状况。在酵母的正常生长过程中，培养基糖量下降 与细胞数增长是反映酵母生长状况的最重要指标，本文以这两个指标考察超临界Co:对酵母菌 生长的影响。 1 材料与方法 1.1材料与试剂:K字活性干酵母 (SacharomycesCerevisiac),湖北宜昌产;葡萄糖，食品级， co,，杭州气体厂产。所用试剂药品均为分析纯。 1.2 仪器:永磁高压反应釜，FYZ-型，大连第四仪器厂;微型柱塞计量泵，JW2型，杭州之 江科仪厂;超级恒温器，CS502一1型，重庆试验设备厂。超临界C仇装置自行装配。 1.3 实验方法: 1.3.】酵母培养方法，在无菌条件下，于6%质量分数的灭菌葡萄糖液中按1.00g干酵母: 60.0m1糖液加人活性干酵母，在35℃水浴中复水90min，得种子液。选用活性干酵母为试验菌种 使各批次间无差异。培养基的配制如下:葡萄糖8%、蛋白陈1.0%,(NH,),S0,0.2%,KHz叽 0.5%,MgSO,7H,00.04%、Cacl,0.01%质量百分浓度。250nli三角烧瓶装量150m1，每一试验条 件平行配三瓶，于。.1MPa,121℃下灭菌30min。将种子液按10%的接种量接到已灭菌的培养基 中，恒温培养箱中培养。实验结果取三瓶的平均值。 1.3.2超临界CO,处理酵母方法，实验开始以7s%酒精对反应釜进行消毒，在釜内加人酵母培 182 养液 密闭后置于超级恒温水浴中，并连接管路。打开进气阀，通人C02赶跑装置内空气，并 检杳气密性。CO，经冷井由高压柱塞泵加压进人高压釜，达到预定的压力和温度后，根据实验要 求维持一段时间，慢慢打开气阀，放空CO,.从高压釜中取出样液，根据试验设计的不同条件进 行培养。 1.3.3分析方法:还原糖的测定，3.5二硝基水扬酸分光光度法W，脂肪含量的测定，索氏提取 法[71酵母数的测定，血球记数法jsl。 2 结果与讨论 2.1超临界C02处理酵母种子液对其生长的影响 酵母种子液在35℃经不同压力的超临界CO，处理lOmin后，以及在35℃经10AMpa的超临 界co:处理不同时间后，于30℃下培养，培养基降糖状况如表1所示。 衰1超临界CO,处理的醉母在30℃下培养的降摘状况 培养时间 //h 不同处理状况 4 8 12