我国HIV-1B′亚型毒株GAG基因变异特征的研究.pdfVIP

H CL M MLCCCC4002 LUU61． 论文汇编 375％、75％、75％。比较两组小鼠的血清样品以1：50稀释时的的抗原性明显强于S蛋白8，这与动物冠状病毒抗原性的一些研 A630nm值，在第4周出现显著性差异，随后差异的显究结果相似“，提示N蛋白可能可以作为比较敏感的血清学检测 著性进一步增加(表1)。 抗原，但需要进一步研究N抗体出现的时间，以确定其早期诊断 sen 意义。本研究还发现N蛋白在大肠杆菌中可表达出三种分子量的 Table1 Detectionofanti-SAKS-CoVin of IgG inmatmizedmice 蛋白条带，用Nj—NTA亲和树脂纯化表明小分子量条带位为N蛋 gene 白的氨基端产物，这与本实验室报道另一种单正链RNA病毒一 HCV的核衣壳基因在原核系统表达出三种分子量的蛋白相似，其 机制尚需进一步研究日。 本研究构建N蛋白基因疫苗pCI—N免疫小鼠，三次免疫后 小鼠抗N抗体阳转率达75％。试验组与对照组小鼠血清的ELISA 2．5小鼠T细胞增殖反应的检测 检测值在第二次加强免疫后出现显著性差异，差异的显著性随后 用无关抗原BSA刺激，两组小鼠的T细胞均无增殖反应，用进一步增大，表明基因疫苗可诱导特异性抗N蛋白抗体。N蛋白 重组N蛋白刺激后，pCI—N免疫组小鼠的脾细胞发生明显的增殖 为病毒体的内部蛋白，其诱导的抗体一般无病毒活性，但诱导的 反应，与pCl—neo免疫组比较有显著性差异(P0．05)。(表2)细胞免疫应答可激活CD4_、CD8叮淋巴细胞，通过细胞因子的间 Table2TheT of irn- 接作用和细胞毒的直接作用清除细胞内病毒。由于病毒内部蛋白 lymphocyteproliferativeresponsegene munizedmicestimulatedrecombinantN in by anngenvitro(S1)的遗传稳定性高于病毒体表面抗原如包膜糖蛋白，作为T细胞免 疫候选抗原更具有研究和开发意义。有报道将小鼠肝炎冠状病毒 (MHV)的S和N蛋白同时免疫，N蛋白所诱生的细胞免疫应答能 协同S抗体清除病毒，联合免疫的抗病毒效果明显强于单一S蛋 2．6小鼠DTH反应的检测 淋巴细胞被特异性抗原的致敏情况，小鼠的免疫检测结果表明， pCI—N免疫组小鼠左右后足垫厚度之差为7．2-+1．23x10。mm， 胞。SARS患者细胞免疫机能低下是病毒得以较长时间持续感染 pCl—HeO免疫组为1．4±041x10-2Inm，表明质粒pCI—N免疫能诱导 小鼠DTH反应(P005)。 的重要原因之一，如用免疫接种的方法诱导和加强N蛋白的细胞 3．讨论 免疫应答可能有利于促进病毒清除181。 SARS—CoVN蛋白是含422个氨基酸残基的碱性蛋白，在 本研究通过进行SARS—CoVN蛋白的抗原性分析和基因免 病毒体装配期间，N蛋白与病毒RNA的包装信号结合，引导形成疫实验，