关于应力—生长关系的一组实验的研究——重庆大学生物工程学院近期的研究工作举例.pdfVIP

关于应力一生长关系的一组实验研究 — 重庆大学生物工程学院近期研究工作举例 重庆大学生物力学与组攀工程教育部重点实验室 400044 蔡绍哲 卢 晓 吴泽志 王远亮 王红兵 叶志义 潘 君 Email:Bio承gaedarn YC.Fung提出 应“力一生长关系”是生物力学活比的灵魂，近年来我们实验室的基础研究工 作不少是围绕这一主题进行的.举例简介如下: 机械拉伸对血管平滑肌细胞枯附及生长的影响 通过自行研制的 “四点弯曲梁”实验装置对血管平滑肌细胞 (VSMC)加载培养，并结合显微 形态观察和计算机图像处理系统测量细胞铺展投影面积、微管吸吮实验系统检测细胞与表面的粘附 力、a一肌动蛋白(actin)免疫组化试验，了解细胞骨架发育和排列取向、流式细胞仪检测细胞动力 学以及细胞生长行为等认识VSMC对应变刺激的响应 本实验装置实现的对VSMC应变刺激为500-1500ps在体VSMC受到的拉伸应变为10%- 20%，我iiIA择较小的应变量是为了考查VSMC粘附、铺展、生长、表型发育对机械拉伸刺激的敏 感性及其早期的适应rL反应过程 细胞的粘附、铺展是一个相当复杂的过程，需要细胞骨架、细胞膜和粘附系统的共同作用.整 合素蛋白 〔integnn)是介导细胞和细胞夕窿质粘附的主要细胞表面受体家族 整合素蛋白与胞外 配体结合时形成粘着斑 (focaladhesion)，整合素本身易聚集在粘着斑部位，同时将细胞夕窿质蛋 白连接到胞内细胞骨架蛋白.许多酶及能量转换和细胞生长的物质，以物理方式被固定在细胞支架 上，粘着斑处包含大量信号传递的级联物质，如酪氨酸激酶、蛋白激酶C,CaZ{‘依赖性蛋白酶以 及不同的原癌基因和癌基因的产物.由粘附系统连接细胞内外骨架形成的物质连接，提供了分子水 平上使力学和生物化学整合的可能.本研究表明，加载1-4hVSMC表现出活跃的粘附铺展调整，特 别是加载初期lh内，VSMC粘附 (投影)面积减小，单位投影面积粘附力较对照组明显升高，可 能是由于局部粘附斑密度增加或局部粘附分子结合力增强所致，但其确切机制还缺乏直接的实验证 据 加载4h后VSMC粘附、铺展及单位面积粘附力与对照组均无显著差异，表明细胞已对加载产 生适应.VSMC生长环境自始至终存在力学的影响，VSMC通过一些主动机制响应应力应变刺激 并达到一平衡状态，符合生物体对外环境具备适应能力的普遍规律.在体动物实验也证明血流量改 变可引起动脉重建、半径随着血流量的增加而增大，即产生适应性变化. 加载24h后细胞动力学检测表明，细胞分裂指数加载组 (0.39)小于对照组 〔0.48)预示出 现一定程度的生长抑制.文献报道，拉伸 基〔底膜伸长比27%)对动脉平滑肌细胞增殖无明显影响， 而可致静脉平滑肌细胞增殖加快.Kulik等子彩道0.33-0.51-1,710-20%应变对羊肺动脉平滑肌细胞的 增殖无影响.压力超载下血管构型发生改建，即出现VSMC增殖和VSMC重排.是否是超出生理 范围的加载可致VSMC增殖，小于生理范围的机械拉伸对VSMC生长抑制的影响，还有待于进一 步的实验验证.但实验组在a-actin发育L表现出的明显变化，说明VSMCa-actin发育对机械拉伸 刺激很敏感.a-actin为收缩表型平滑肌细胞的特征结构，其发育加快 预示机械拉伸促使VSMC 趋于成熟表型.sumps。对圆形培养板上生长的VSMC施以应变24%的交变刺激3天，发现细胞取 向在圆形培养板边缘呈周向排列即与应变方向垂直.本研究发现实验组与对照组在4倍光镜下取向 无倾向性.但局部细胞 细〔胞集落或相邻细胞群)，加载组a-actin取向较一致，而对照组呈无序状 态 图〔4a、b).以生长灶为中心而发育起来的细胞集落或细胞群，算a-actin发育、取向与它们 共同的生长行为及细胞间的通迅联系可能存在某种关系. 机械刺激对成骨细胞粘附、铺展、粘弹性的影响 采用四点弯曲梁实验装置 〔自行研制)对离体培养的大鼠成骨细胞，施以拉伸应变影响，通过 一~~~~~~ 微管吸吮系统、显微摄录、计算机图像系统了解细胞的粘附、铺展行为和细胞的粘弹 变化 认r 细胞形态、粘附力及变形性对机械刺激的响应. 所有细胞都含有能稳定细胞形状的内部丝状框架，即骨架系统(CKS)，在活细胞中骨架系统 可产生主动张力，即预平衡应力.