乙肝病毒核酸压电传感器地研究.pdfVIP

乙肝病毒核酸压电传感器的研究 周晓东刘栗加胡敏王磊磊胡继明 武汉大学分析测试科学系武汉430072 压电核酸传感器是在适当的温度、pH值、离子强度下，电极表面的核酸探针分子 能与靶序列选择性地杂交，形成表面的双链DNA(dsDNA)，从而导致电极表面质量的 改变，由于其频率变化量与晶体表面的质量变化线性相关，这样便达到了检测靶序列(或 特定基因)的目的，而且反应前后的振荡频率变化可以说明杂交的程度、过程等信息。 核酸杂交所严格遵守的碱基配对原则奠定了压电核酸传感器的特异性，其设计的依据就 是核酸杂交动力学。作为一种简单、快速、定量和特效的技术．压电核酸传感器在近十 年来越来越受到人们的重视|lI，它与通常的探针技术如放射性同位素标记、荧光标记等 相比，不仅能够无须标记进行分子识别，有极高的灵敏度和报低的检出限，同时具有仪 器简单，操作方便的特点。它的出现为生物学、医学、药学等领域的应用研究和检测开 辟了广阔的前景。本实验室在这个方面做过一定的摸索性工作，曾成功进行了肿瘤坏死 因子的测定12I。 我国是乙型肝炎的高发地区．乙型肝炎是由乙型肝炎病毒(HBV)引起的病毒性 传染病，其病毒核酸(HBVDNA)在患者血清中含量的检测为诊断、预后与治疗疾病 提供了关键性的依据，有者极为重要的意义pI。 本实验室自制的压电传感装置采用聚乙烯亚胺、戊=醛交联法将乙肝病毒核酸探针 ．固定在石英晶片金电极上，使其与溶液中HBV病毒杂交引起晶体表面质量的变化，从 而得到反应的有关信息，达到定性、定量检测乙型肝炎病毒的目的。 聚乙烯亚胺一戊二醛交联固定方法的原理为：在压电晶体金电极表面先形成一层高 分子薄膜，该高分子薄膜能稳定的吸附于金电极表面，同时相当于在电极表面引入亚胺 基，然后通过双功能试剂戊二醛将核酸分子联接到电极表面14l。实验表明，聚乙烯亚胺 一戊二醛可形成较为固定的膜，其膜性质难因pH值、离子强度，溶剂或温度的改变而 改变。 ． 我们进行了核酸探针饱和固定量、杂交时间等实验条件的摸索，采用稀释的一组乙 肝病毒(HBV)标准溶液进行测定，扣除空白背景，得到浓度响应曲线，如图l所示： 在乙肝病毒浓度为O．02p g／uL到O．14ug，uL时，晶片频移值与浓度有较好的对应关系， 曲线的线性很好拟和，基本可用于定量测定；当浓度进一步增大时，颓移值与浓度不再 有明显的对应关系，我们认为这是杂交过程中病毒核酸分子的量大大高于与探针结合达 到平衡所需要的量，探针不再结台。同时病毒核酸分子浓度的增大在一定程度上改变了 杂交的条件所带来的影响。 在乙肝病毒HBV溶液中加入寡核苷酸片段干扰，这些核酸片段引起的频移值较小， 影响在50Hz以下，说明此传摩器的选择性较好。 采用晶片再生方法，粘附于晶体表面的物质基本被洗脱下来，晶片可以重复使用5 次，基频变化不大。 J47 m 嘲 枷 瑚 辨 ¨苦■毒誓 啪 啪 ¨ 。 HBv#度v脚L 圈1．病毒檐酸浓度的顿移响应曲线 参考文献 Guilbault 1．O’Sulivan R G．G，Anal．Lett．，1999，32：2353 OK,Vaughan 2．胡毅，武汉大学硕士学位毕业论文，1998 M．Anal．Chim．Acta,1995，309：19 B，Oratzel 3