多胺生物传感器地研究.pdfVIP

多胺生物传感器的研究 晗尔滨医科大学公共卫生学院 禹 萍 张呖管春梅 哈尔滨市第一医院 禹宏 哈尔滨市卫生防疫站 崔国权 多胺广泛存在于生物细胞内，与细胞的增殖、分化密切相关。人体多胺水 平作为肿瘤的诊断标志物日益引起人们的关注。但多胺在人体液中含量极少， 其检测方法的灵敏性是建立检测方法的关键。因此，利用生物传感器快速、特 异的特性，建立多胺测定方法，对临床研究多胺在人体中的作用及肿瘤诊断具 有实用意义。 本研究是将二胺氧化酶固定化制成酶膜，与氧电极组合成多胺传感器。固 定化的二胺氧化酶可催化多胺氧化，生成过氧化氢和氨。反应式如下： putreseime+O，+H，O～一H’0+NH3 在反应过程中有氧的消耗，通过测定氧的消耗量，可对多胺进行定量。 材料与方法 一、材料 二胺氧化酶(Sigma)，牛血清白蛋白(中国科学院上海生化所附属东风试剂 厂)，戊二醛(上海化学试剂采购供应站)，腐胺(sigma)，极谱式氧电极和LM·l 型测氧仪(中国科学院上海冶金所1。 二、方法 l、二胺氧化酶膜的制备 pI磷酸盐缓冲液 称取10．00mg二胺氧化酶+1．00rag牛血清白蛋白+50 l fPH7．2)，溶解后，浸入面积为1士1的尼龙膜3小时后，加入5％戊二醛100u 放置2小时，用磷酸盐缓冲液(PH7，2)冲洗，安装在氧电极上。氧电极外固定引 入体积为1001．tl的流通池。 2、样品测定 利用虹吸原理将载液引入流通池，打开测氧仪，仪器显示出空白溶液的电 p 流值，当电流值稳定后，将100I试液注入流通池，试液中J薪胺扩散至酶电极 表面与酶膜中二胺氧化酶发生氧化反应，消耗掉溶液中的氧，使电流值降低， 记录注样前后电流值之差，应用标准曲线法对多胺进行定量e 结果与讨论 ～、条件试验、 1、最适酸度的选择 酸度对蘸的催化作用影响最大，周此，每种酶都有其体现最大活力的最适PH 范围。率试验选择0．1moVL Na214PO,-KI-12PO_‘缓冲体系，测定多胺传感器在不 同PH值的响应值，结果见表l。 表1 不同PI-I值电极的响应值 从实验结果可见，当PH7．2时酶传感器响应值晟大。 2、最适温度的选择 酶是一种生物催化剂，在一定条件下，酶只有在最适温度下方可表现出最大 活力。表2为多胺传感器在不同温度下的响应值。 3、载液流速 载液流速对测定值影响较大，流速快测定速度快，但响应值小。载液流速慢， 响应值虽大-但测定速度慢，电极恢复的馒。综合考虑本试验载液流速选定为 二0滴／分钟，效果较好。 二、酶传感器的性能试验 l、精密度 应用试验确定的测定条件，重复测定标样8次，结果见表3 表3多胺传感器精密度 次数 l 2 3 4 5 6 7 8 响应值(my)31 35 37 34 35 30 31 3l 经统计学分析：标准差S=2．56变异系数CV％=7．77％。 2、标准曲线 该传感器的线性范围为0．1～O．5umol／L，测定结果见表4 表4多胺传感器标准系列 0．2 0．3 0．4 0．5 浓度(1．tmoFL)0．1 响应值(my) 7．0 11．O 19．0