四种藏药中没食子酸含量测定的HPLC的研究.pdfVIP

LC—016 四种藏药中没食子酸含量测定的HPLC研究 徐小平 王曙 (四川大学华西药学院，成都610041) 摘要 本文建立了4藏药中没食子酸含量测定质量控制法。方法采用HPLC法分离了藏药中 的没食子酸。结果方法的精密度、重现性和回收率分别为1-3％、2~4％和98—101％，在 没食子酸浓度为0．1～150吲ml范围内线性关系良好r≥O．999。结论本文建立的没食子酸的 HPLC法使用于大多数藏药中没食子酸的含量测定的质量控制。 没食子酸，叉称五倍子酸，纯品为白色或淡黄色针状结晶粉末。在藏药材诃子、毛诃子、 余甘子等中含量丰富。而上述药材在藏药处方中出现频率较高，具有清热调和气血、抗疲劳 等主治功效。常见的含量测定方法有光谱法、比色法…、TLC”‘”和HPLC”’4。”法等。本文采 用HPLc法对三果汤、25味余甘予丸、16味马蔺子丸和5味沙棘散等四种常见藏药中没食子 酸的建立了含量测定HPLc方法，拟在完成上述藏药仿制药的质量标准的升级同时补充目前 藏药标准中该类药材的含量测定标准。使古老藏药逐渐完善其质量的科学控制。 1仪器与试剂 XW-16旋涡混合器(中国，江苏)：LC一2002智能化色谱工作站(戴朝政教授制作赠送)。 1．2试药样品：三果汤、25味余甘子丸、16味马蔺子丸和5味沙棘散(西藏金珠雅砻藏 药有限责任公司提供)；没食子酸对照品(中国生物制品检定所)，甲醇(色谱级，江苏淮阴 试剂公司)；超纯水(中国，成都)；其它化学试剂均为分析纯。 2方法与结果 2．1色谱条件 色谱柱：oDS200×4．6m，5 波长：280m；进样量：101；柱温：30℃；理论塔板按没食子酸计算不低于3000分 离度大于1．5。 图1没食子酸对照品HPLC圈 图225味余甘子丸中没食子酸HPLC圈 2．2供试品溶液及对照品溶液的制备 2．2．1供试品溶液的制备 取供试品细粉少许，精密称取，置25ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，超声提取20min， 静置，用0．45m超滤膜滤过，滤液作供试液。 2．2．2阴性对照液的制各 将处方中含没食予酸的药材如余甘子、诃子和毛诃子等去除后，按供试液制备方法制备 阴性对照液。 2．2．3对照溶液的制备 取没食子酸对照品适量，精密称定16．19mg，置50ml量瓶中，加甲醇溶解稀释至刻度， 摇匀，作为贮备液，置冰箱内保存备用；精密量取回温后贮备液lml置lOml量瓶中，加甲醇 稀释至刻度，配成32．38g／ml作为工作液。 2．3线性关系的考察 取没食子酸对照品少许，精密称定8．64mg，置于25ml量瓶，加甲醇溶解至刻度成 r=O．9991 分别吸取101，注入HPLC仪中测定。线性方程为：Y=37327x+52114， 2．4进样精密度试验 取上述没食子酸对照溶液在同一天反复进样6次HPLC测定，记录峰面积，计算得精密 度，见表1。 表l没食子酸方法精密度考察(n=6) 2．5加样回收试验 取各处方样品细粉(约70mg)各9份，精密称定，分为三组并按各处方中没食子酸的 含量的±20％分别在三组中加入没食子酸对照品。置于25M量瓶中，加甲醇溶解至刻度。摇 匀，超声提取lOmin，静置，滤过，进样HPLC测定。计算扣除样品中没食子酸量后，得没 食子酸加样回收率见表2。 表2加样回收率考察(n=3) 2．6稳定性试验 取二十五味余甘子丸等各处方样品粉末约lOOmg，精密称定。按供试溶液制备方法制备。 对统一批号样品反复测定6次，计算个处方含量的稳定性见表4。 表4样品测定方法的稳定性考察(n=6) 2．7重复性试验 取二十五味余甘子丸等各处方样品粉末约lOOmg，精密称定。按供试溶液制备方法于不 同日分别制备。对统一批号样品测定6天，计算个处方含量的重复性见表5。 表5 样品测定方法的重复性考察(n=6) 2．8样品的测定 分别取个处方各批号样品细粉各适量，精密称定，按供试溶液项下