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四种疫霉基因芯片检测方法 肖杰文1章桂明2‘程颖慧2王颖2杨伟东2姜子德1 DetectionforFour of Microarray SpeciesPhytophthora XIAOJie．wen Zi．del 1，ZHANGGui．min92，CHENGYing—hui2，WANGYin92，YANGWei—don92，JIANG China 510642，China；2． (J『．DepartmentofPlantPathology，SouthAgriculturalUniversity，Guangzhou Plant and Bureau，Shenzhen QuarantineLab．ofShenzhenExit—Entry Quarantine 518055,China) Inspection for and detectionmethodfour of Abstract：Microarray speciesPhytophthora(Phytophthoranicotianae．P．capsici,Pinfestans inthis wasabletodetect nucleotide．5 and6 只boehmeriae)wasdevelopedstudy，which single genus—levelprobes from30 werescreenedfor withtraditionalidentification species—specificprobes probes microarray．Compared method，this methodCalldetectthefour atsalTletime． speciesof砌ytophthora Key boehmeriae words：genechip；P的tophthoranicotianae；Phytophthoracapsici；Phytophthorainfestans；P姆tophthora 烟草疫霉(Phytophthoranicotianae)、辣椒疫霉(只capsici)、致病疫霉(Pinfestans)和苎麻疫 霉(Pboehmeriae)是疫霉属中4种为害较严重的植物病原菌，常常给农业生产带来巨大损失。对于 这些病原菌，经典的形态学鉴定方法因需要培养产生供鉴定用的孢子，且有的物种还需要进行致病性 测定，故检测耗时较长，而常规分子检测方法虽能缩短检测时间，但往往只是单一物种的鉴定，也不 完全能满足实际需要，因此，需要探索适应田间和国境口岸快速通关的高通量检测技术。本研究以这 4种疫霉为主要实验材料，通过与其近似种及其相关种在核糖体区、CoxI区和CoxlI区这3个片段的 序列进行分析比较，分别设计引物和探针，应用基因芯片检测法对这4种疫霉进行快速检测方法研究。 l材料与方法 1．1供试菌株 本研究中所用菌株及其来源见表I。 1．2主要试剂及材料 基片、点样液、杂交液、洗脱液由上海博星基因芯片有限公司提供，探针和引物由大连宝生物有 BiosciencesUKLimited。 限公司合成，Cy5一dCTP购自Amersham 1．3DNA的抽提、纯化和浓度测定 参照章桂明…的方法，提取菌丝DNA，用核酸蛋白紫外分光光度计测定DNA的纯度和浓度。 14实验用引物和探针 核糖体区通用引