生化实验讲解.ppt

一.生化实验概况 参见 《生物化学实验典型教案视频》 实验分为 两大块： 第一块 单元操作 验证性实验 含实验1～7 独立操作。 第二块 系列实验 综合性 设计性实验 含实验 8（1 ～ 5 ） 要求成立 合作小组 分工合作 实验方案 讨论决定。 注意事项 1.填写实验预定表，1人1组1个操作台。 2.利用实验教材、实验软件（演示、网络）认真预习。 3.认真撰写实验预习报告，添上记录和计算结果就是实验报告，报告要图（表）文并茂。 4.携白大褂、实验预习报告、实验教材、文具（铅笔、直尺、坐标纸等）按时到实验室做实验。 5.当场完成实验报告，搞好桌面卫生，经教师检查批准后才能离开实验室。 6.班长安排值日生打扫实验室卫生。 生物化学实验考核 1.实验报告：50%-60％，含预习报告、实验表现、实验报告写作、结果合理性等方面。 2.理论笔试：40%-50％，明确实验目的、掌握实验原理、熟悉实验操作。 实验二.粗脂肪的定量测定——索氏（SOXhlet）提取法 实验三.氨基酸的分离鉴定—纸层析法 四个同学一组，微量注射器最好专用；如用同根注射器取不同样品，蒸馏水清洗5遍以上，以点样样品润洗后，再取样点样。 层析过程中观察层析距离和展层时间间的关系，绘图；展层距离为滤纸总长度一半以上时，即可停止层析。 显色 ：热风吹干 时在点样侧吹。铅笔标注溶剂前沿和层析斑点的中心，计算Rf值。 凡跟滤纸接触的操作皆带手套。 实验四.血清蛋白的电泳 将粗面朝上放在缓冲液中浸泡20分钟。 熟悉点样器操作：粗细均一的一条线。 电泳前混匀电极液；滤纸桥要平。 染、脱色要摇晃培养皿。条带要分析。 实验五.微量克氏（Kjeldahl）定氮法 消化：浓酸下把蛋白中1摩尔有机氮转化为1NH3→1/2 NH4 2SO4 蒸馏 ： 浓碱可使消化液中的1/2硫酸铵分解，游离出1氨，氨使硼酸溶液中1氢离子浓度降低。标准酸滴定，回复硼酸原来氢离子浓度为止。即标准酸的摩尔数 ＝蛋白中氮的摩尔数。 注意：不要干烧。夹层水保持3/4～满球水。 实验六、七. 标准曲线法求蛋白和核酸含量 标准曲线法，作图求。 试管要清洗干净，无水，稀释时先用手振荡均匀，再在振荡器上均匀。 注意比色皿的清洁及分光光度计的正确使用。 枪的正确使用。 * * 滤纸斗:不高于虹吸管 花生碾碎去皮，电子天平称重，2g 左右。 空平底烧瓶洁净无水，电子天平称重。抽提结束（不再有溶剂滴下）后的空瓶在水浴锅上放3分钟后，烘箱烘干。手套拿出，立即电子天平称重。 整个装置在一条直线上。 用后的平底烧瓶用热水和洗涤剂洗净 。 先平衡，再戴手套取滤纸操作； 点样前铅笔标注点样顺序；点样斑点直径不超过0.5cm,少量多次，吹干再点。斑点间距离2cm左右。 1.2~1.5cm *