原子力显微镜观察神经元细胞地研究.pdfVIP

2001年增刊 分析试验室 Vol.20.Suppl 2001年11月 ChineseJournalofAnalyticalLaboratory 2001-11 原子力显微镜观察神经元细胞的研究 李 屠 袁悼斌 ‘ (中国科学技术大学研究生院应化所，北京100039) 摘要:原子力显微镜 (AtomicForceMicroscope，简称AFM)是新近发展起来的一种高分辨、操作简 便的纳米级的扫描探针显徽镜，另外还有常用的扫描隧道显微镜和扫描电化学显微镜11aAFM用于观 察细胞比其余扫描探针显微镜有优势闭，因为其他扫描探针显微镜根据隧道电流或电化学原理，要求被 测样品具有电活性，由于细胞表面的成分复杂，有脂类、蛋白质、糖类等，根据电化学的方法较复杂， 分析困难，且易于污染针尖。而AFM是根据微悬臂随着样品表面凹凸不平的变化而改变其角度，从而 使反射的激光光路发生变化，接收到的信号强弱不同，继而表征了物质表面形貌的变化。AFM 比传统 的光学显微镜和电经由较大的优势，传统的光学显微镜虽然操作简单，但由于其成像的物理原理，光学 显微镜的最大分辨率不超过可见光波长的一半，故分辨率低;而电子显微镜虽可以提高样品的分辨率， 但其样品的前处理步骤萦琐，需经过固定、包埋、切片等技术处理;AFM在提高分辨率的同时，能简 化样品处理手段。AFM的使用广泛，能用于材料科学3(1、分析化学in]、生命科学151以及临床医学等领域， 但由于其起步晚，有一些领域的研究尚处在初探阶段。本文尝试用AFM观察中药作用后的神经元细胞 的形态变化，试图从单细胞水平上对药物作用机理进行阐述。 试验仪器及材料:HL-11型微机数字控制扫描探针显微镜 (中国科学院电工研究所，北京市中科机 电设备公司):中药:安宫牛黄丸 中〔国同仁堂集团公司提供);小鼠神经元细胞 〔由中国中医药研究院 中药研究所提供);试剂均为分析纯。小鼠的脑神经被切碎，在。.25%的胰蛋白醉中消化 并放置在Cq 培养箱中370C恒温30分钟。样品用PBS缓冲液冲洗并过滤。再将神经元在盖玻片上培养48小时，最 后粘附到金属基座上进行观察。 结果表明，小鼠神经元细胞在安宫牛黄丸的作用下，对照组与给药组的细胞间隙、大小和粗糙度会 发生变化，并且安宫牛黄丸组和简方组的情况不一样，分别为给药组、中药中剂量、大剂量和简方中剂 量、大剂量组，结果表明，对照组的神经元细胞生长较正常，间距较均匀，粗糙度为R,=2.3nm,Ra=2.5 nm,Ry=9.2no,R,=4.8nm，而给药中剂t组的神经元细胞生长较多，相距紧密，细胞形态偏小，粗糙度 不同;给药大剂量组细胞间距较开，细胞形态较正常:简方中剂量组细胞生长较好，简方大剂量组细胞 挤压严重、细胞浓缩变形。利用AFM观察小鼠神经元细胞的变化，可形象地表征细胞形貌的变化，图 像较清楚，立体感强，并可观测粗糙度. 关键词:原子力显微镜 观察 神经元细胞 参考文献 microscopy.Anal.Chem.2000,72(12):189 [1]LilleheiPT,BottomleyLA.Scanningprobe P,Boog朗itsM,SnauwaertJ,HellemansL.Imagingurenicredbloodcellwiththeatomicforce [21ZacheeP，BOOgae .1994,14:197 microscope.AmJNephrol (3]Scanningprobemicroscopyasatoolformaterialsresearch.Gentle.lank.Mater.Forum1998,22:123 [4]BaiC,WangC,SunnerylX,WolynesYG.Singlemoleculephysicsandchemistry.NatLAcad.Sci.U.S.A. 1999,96(20):11075 [5]KiselyomOI,YaminskyIVScanningprobemicroscopyofproteinsandprotein-membranecomplex