用亲与膜色谱法去除内毒素的研究.pdfVIP

LC-018 用亲和膜色谱法去除内毒素的研究， 魏桂林 商振华王俊德 刘学良于亿年 高凯 (中国科学院大连化学物理研究所 大连 116012) 内毒素 (Endotoxin)是一种广泛存在于水、食品、医药制剂及体液中的化学物质，是革兰氏 阴性细菌细胞壁外壁层上的特有结构，是一种高分子量的复合物，具有多种生物学特性，能使人体 产生各种反应，少量内毒素 (2ng/kg体重)静脉注射就可以引起发烧，大剂量可以引起血液循环障 碍和内毒素休克。在正常人体内，肝脏在内毒素的清除与解毒过程中起着重要作用，使血液中的内 毒素含量保持在较低水平，如肝功能严重受损，经肠道吸收的内毒素就可通过肝脏进入体内循环， 形成内毒素血症，进而加重肝脏损害，并引起肾功能减退等。据文献报道，败血症、尿路感染、脑 膜炎、重症肝病、血栓性脉管炎等疾病都可能与内毒素有关。因此，如何去除医药制剂及体液中的 内毒素，一直是研究的热点。 对于内毒素的去除，起先采用活性炭吸附w、化学降解2][、超滤膜、离子交换色谱等方法。但 由于它们对内毒素的选择性并不很高，因而只适于从相对较为稳定的小分子物质溶液中去除内毒素。 在许多情况下，尤其是在对一些分子量与内毒素分子相近的生物医药制剂中内毒素的去除。采用上 述方法则达不到理想的结果。因此，目前研究的主要侧重点已转移到亲和色谱方面。常用于内毒素 去除的亲和配基是组氨酸和粘多菌素，这两种配基对内毒素的去除效果较好，但也有各自的局限性。 由于内毒素的分子中含有带负电荷的磷酸基团及疏水脂肪链!77，我们制备了一系列的胺类疏水 荷正电配基，用于去除内毒素，获得了理想的去除效果。 1亲和膜的制备 滤纸的主要成分为纤维素，一般是由精制漂白的木浆或棉浆等纯洁纤维组成，具有较好的强度 和通透性，因此可选择滤纸这种纤维素膜作为亲和基质，键合配基，制备亲和膜。 由于纤维素在结构上存在着结晶区和非结晶区，一般纤维素的衍生反应发生在非结晶区，这样 使得可活化基团含量较少，所以以纤维素作为亲和基质，一般都要对其进行改性。本工作中采用甲 基丙烯酸缩水甘油酪 (GMA)对纤维素接枝共聚，从而增强纤维素的强度，同时也增加了它的活性基 团，提高纤维素膜键合亲和配基的能力。 具体制备过程如下:于一定量的去离子水中加入成型的纤维素膜 (衫7mm)，升温至80℃后，依 次加入GM、过硫酸钱(哪)、硫代硫酸钠 S〔TS)，间歇振荡，反应lh,接枝共聚后，加入一定量 的己二胺 乙〔二胺，对苯二胺).保持70--80℃反应3h，去离子水洗净，千操，即可得3种荷正电亲 和膜:己二胺亲和膜、乙二胺亲和膜及对苯二胺亲和膜。 将亲和膜装入本实验室设计制造的膜分离器中，可用于评价对内毒素的去除效果。 .本文为国家自然科学基金资助项目 通讯联系人:魏桂林，0411-3693512 2 纤维素膜结构接枝前后变化 a 原始膜 b GMA接枝后 图1 电镜扫描图 图1是纤维素膜接枝前后的电镜扫描图(表面)。由图la可知，原始纤维素膜是由粗大纤维及 细小纤维交织而成的，具有不均一的网络结构。经GMA多相接枝共聚后 (图lb)，并未改变它所具 有的网络结构。但细小纤维明显减少，粗大纤维之间的脉络变得更加清晰，纤维束的结构更加致密， 因此经接枝共聚后的纤维素膜机械强度更好. 3 内毒素的去除 将离子强度为0.15,pH6.0，内毒素浓度为1.OEU/mL的NaC1溶液以0.5mL/min的流速通过 妾和膜分离器，每隔一段时间取流出液样品，检测其中的内毒素浓度，计算内毒素的去除率. 肪 ︸ 产 们 4 9 奋 叱 成 报 叨 峨 书 朋 于 邵 时间 .〔in)