透明质酸发酵工艺地研究.pdfVIP

透明质酸发酵工艺的研究 许伟坚张淑荣谭夭伟 (北京化工大学生物化工系 北京t00029) 摘要本文研究了用善疫链球茸发酵生产透明质酸的工艺．对发酵的搅拌转速、温度，糖求虎、 表面活性荆、pll值等条件进行了优化，得到最佳发酵条件．透明质酸的炭肆水平迭到5．0—6．59／L． 共t词透明质酸发酵善裹健球茸 “透明质酸(Hyaluronic acid，HA)是一种大分子桔多蒂，广泛地存在于动物体的结缔组织中。 近年来随着对HA性能的了解逐渐深入，其生产和应用研究也越来越广泛。目前，它主要用于 临床，如碾科手术、诊断以及化妆品生产等方面．目前透明质酸的生产方法为化学法Ⅲ，有许多 缺点，如：由于原料不易得到，因此产量受到限制；提取工艺复杂、周期长、耗费大量的易燃 有机溶剂，成本较高。因此国内外目前大力研究开发用微生物发酵法来生产透明质酸，其中兽 疫链球菌(Streptococdus 。～1 ‘ ’ 法生-产^}弧的发酵t艺，一彳等蓟亍侥诧的爱酵条件： ． 1．材料与方法 、 1．1莆种与培养 菌种：寓i诱变后筛蟓出的透明质酸高产菌株兽疫链球菌。 种子培养基：葡萄糖2％，酵母膏O．1％，蛋白胨1％，tit酸氢：钠0．16％，碳酸氢钠O．2％，硫 酸镁0,01％，牛肉汤5％(v／V)。发酵培养基除糖浓度外其余条件与种予培养基相同。 发酵条件：在2L发酵罐中进行发酵，种子液29℃静置培养20h，接种量为8％，通气量为 1．28vvm． 1．2分析方法 牯度 ，s 0 2 ● 6 ● ∞ 口 * ∞ 时间，h ’沁I#lOrhn一… 时问，h 圉t搅拌转速对发酵的影响(发酵壤粘度的变化) 圈2搅拌转速对发酵的i§lli(ilflitli的变化1 发酵结果的好坏与发酵液的粘度高低直接相关，粘度高，则透明质酸产量和分子量都较高， 因此用直径1．5ram的毛细管粘度计直接测量发酵液的粘度(以时闭计)，并以此作为发酵条件优 化的依据。用手持糖量计测定发酵液糖浓度。722分光光度计在600nm下测定发酵液中菌含量 变化。透明质酸分析方法采用硫酸．咔唑法HI和氨基葡萄糖法嘲。 2结果与讨论 2．1搅拌转速对发酵的影响 由于透明质酸为高分子物质，发酵液粘度较高，搅拌转速对发酵所得透明质酸的产量及分 r／min。 子量均有较大影响，实验方案如下：搅拌转速分别为：180r／min；24160r／min；3400 实验结果如图1、图2所示。 由图l和图2可以看出，转速越高则产透明质酸越多，糖的利用率越高。又进行了转速为700 r／min的实验，发现其透明质酸产量明显高于400r／min时的产量。所以较高转速有利于发酵。 但研究结果表明，搅拌转速高于700r／min时，透明质酸的分子量会受到破坏，因此，发酵时 r／min。 选用搅拌转速700 2．2温度对发酵的影响 该菌株为从牛鼻黏膜中筛选出来，适应生长温度可能接近37℃。选择29℃、33℃和37℃三 个温度进行对比，结果如图3、图4所示。 ∞ 枯度。 ／s∞ 5 * 15 5 时间，ll 时间m 图3温度对发酵的影响(发酵液粘度的变化) 圈4温度对发酵的影响(菌体浓度的变化) 粘度