生物微胶囊固定化酵母培养地研究.pdfVIP

生物微胶囊固定化酵母培养的研究+ 张惠勇梅乐和姚善泾“ 0027) (浙江大学化工学院生物化工系杭州3l 种酵母的培养规律，发现生物徽胶囊固定化酒精酵母的产酒精情况与游离培养基本一致．在连续发酵16批 后，仍具有良好的性能．同对固定化产谷胱甘肤(GsH)的产劂睫丝酵母的研究也表明了固定化培养产GSH 量与霹离茁种产量相近． 固定化酵母 乙醇谷胱甘肽 关键词NaCS--PDMDAAC生物擞胶囊 1引言 生物微胶囊是一种新型的固定化方法，通过将酶、蛋白质、微生物或动植物细胞包埋在一层 由半透膜围成的微囊中，可以使生物大分子或细胞留在胶囊的膜内，而培养基的营养成分和细胞 分泌的小分子物质可以自由出入半透膜，从而达到催化、培养或免疫培养的目的i”1。 中期【4】，在90年代发展很快。该体系的最大特点就是制备方法简单，即将NaCS水溶液液滴直接 滴入PDMDAAC水溶液中，就会形成一种中空的，周围由半透膜包围的胶囊，并且还具有其它一 些优点，如较薄的膜层(20～100I=Lm)、较高的机械强度、良好的生物相容性、适宜的传递和截留性 质以及稳定的物化性质Ii“。 微反应器，细胞在按正常方式进行代谢、生长、繁殖以外，还受到了胶囊膜的保护。本文将利用 酵母细胞为模拟体系，考察微胶囊作为生物微反应器在细胞培养时的特点，为扩大微胶囊在细胞 培养中的应用，寻求一般性规律。 2材料和方法 2．1实验材料 2．1．1菌种酒精酵母由浙江农业大学提供，本研究所保藏。产劂民丝酵母(cutilis)为本研究所保 藏。 1，0。 1．0，KH2P04 酵母膏3．0，(NH)2SO,5．0，MgS047H200．5，K2HPOr3H20 0．5， 7H20 7．0。 K，HPO。．3H：O1．0。KH2Po．1．0．酵母膏30．0，pH 2．1．3微囊化材料NaCS由本实验室自制，PDMDAAC购自美国Aldrich公司。 2．2实验方法 国家自然科学基金资助项目(批准号29706009)。 联系人。 10l 2．2．1酵母培养酒精酵母的种子试管斜面培养和三角瓶培养：将活化后的酵母菌在无菌条件和30 产朊假丝酵母的菌体培养：将保存菌种接至摇床培养基，培养24h。 操作条件下，将一定量的酒精酵母或假丝酵母与NaCS溶液混合墒入PDMDAAC溶液中，停留约Ih， 制成含酵母的微胶囊。然后将固定了酵母的微胶囊放入合成培养基。 2．2．3镀囊化酒精酵母的半连续培养将一定量的徽囊化酒精酵母接入200ml发酵培养基中摇床培 养(30C，200r／rain)，定时取样分析，当糖耗尽时，更换培养基，分析培养液中的乙醇含量。如此重复 该过程涟续培养16批。 2．2．4产朊假丝酵母的菌体收集徽囊化的产朊假丝酵母经培养24h后取出微胶囊。经破碎胶囊后 进行离心分离，由沉淀物得假丝酵母菹。用乙醇萃取假丝酵母lh，然后离心，分别收集上滴液(含GSH 的乙醇溶液)和沉淀物(酵母细胞)。由上清液可分析GSH的含量。 2，3分析方法 葡萄糖：采用蒽酮法。 乙醇：采用气相色谱法。 谷胱甘肽：用DTNB[5，5’-dith 定DTNB在波长为412rim处的Of j,值，可得游离盼sH的含量。 细胞浓度：游离细胞浓度采用虹球板计数法。l在检测微囊化细胞浓度时取10令微胶囊。测定 平均粒径，放入纤维素酶液中酶壤，微囊破壁后j释放出酵母细胞。利用血球板计数法计