八棱丝瓜蛋白诱导K562细胞凋亡地研究.pdfVIP

床上有广阔的应用前景。 中药单体Hso诱导肿瘤细胞 凋亡活性的探讨 张冬云2蔡是1崔承彬1闽少羽2 (1．北京生物医药研究所北京lO∞91； 2沈阳药科大学99级研究生扰阳儿0015) 目的：探讨中药单体H90抑制肿瘤细胞生长和诱导肿瘤细胞凋亡的作用。 方法：采用hⅡT法、流式细胞术、细胞形态学特征检测法(颗粒粒度计数仪、荧 v 光显微镜观察)、细胞生化学特征检测法(琼脂糖电泳、Ann目jnbindi聪)等细胞分 子生物学手段，检测磺泊对人大肠癌细胞HCT．15的增殖和细胞周期的影响，以及其 诱导细胞凋亡的作用。采用蛋白质印迹的方法检测药物作用后细胞内凋亡相关蛋白的变 化情况。 结果：H90体外作用于HCT-15细胞24h时后能抑制细胞生长并呈良好的剂量依赖 性，其半数抑铜浓度为9．67越／Ⅱd。细胞形态学特征检测结果表明，细胞在瑚O的作用 下体积缩小，细胞核断裂成碎片状。细胞生化学特征检测结果表明，DNA被降解成 180～200bp的规则断片，细胞内膜的磷脂酰丝氨酸被外翻到细胞膜外。流式细胞仪结果 显示有明显的sub_岛峰，细胞被阻断在岛／M期。蛋白质印迹法检测到捅亡相关蛋白 PARP被剪切。 结论：mO通过诱导肿瘤细胞凋亡来发挥抻{}I肿瘤细胞增殖的作用。 八棱丝瓜蛋白诱导K562细胞凋亡的研究 赵尊1谢捷明1阵朗晃2林竣凯2许建华1 (1．福建医科大学福州35D004； 2．中国科学院檑建省物质结梅研究所) 核糖体失活蛋白(ribo∞rlle ilIac6ⅧtiIIgpm喊ns，RIP)是一类能抑制多肽链延长而使 大多数动物的核糖体失活，影响蛋白质合成的植物蛋白。具有抑制肿瘤细胞和病毒生长 的功能。我们从葫芦科植物八棱丝瓜(L咖口毗增w缸)种子中提取、纯化了一种单肚 飚62细胞株的生长及诱导其凋亡等研究。 本文用MTT法观察了U艮1体外抑制K562细胞生长及用A0忸B荧光法、DNA凝 胶电泳、流式细胞术、电镜、细胞内游离c矿+的测定等方法观察其诱导K562细胞凋亡。 结果显示，不同的LBl蛋白浓度，不同的作用时间，对K562细胞的体外生长、增殖抑制 ·346· 不同，随着药物浓度及作用时间的增加，其抑制率也随之增加。72小时IC∞=15．12旭／ “。经Ao佃染色后，荧光显微镜下可观察到早、中期凋亡细胞的细胞核或细胞质内有 浓染致密的颗粒状黄绿色荧光，核染色质浓缩，核破裂，凋亡小体释放等典型的凋亡细胞 形态学改变；电镜下也可见到部分细胞核膜下染色质凝集成块或半月型，并有凋亡小体形 成，凋亡小体内可见有核膜包绕的固缩的核碎片，线粒体可见肿胀。上述凋亡呈时间及剂 量依赖关系。经流式细胞仪分析不同浓度uLl溶液处理24、48、72小时后，在Go／q峰 的前面，都有明显的、高度不同的亚二倍体峰；LF．1浓度分别为lO、20、40、80旭／砒处理 小时，琼脂糖凝胶电泳能检测到特征性的梯形1adder条带，而对照组仅见一基因组DNA 条带。用uBl v标记率分别为 40、80耀／Ⅱd处理K562细胞18小时后，其ArIrle】cin 33．5％、43．1％，说明LF—l可诱导凋亡细胞早期磷脂酰丝氨酸从细胞膜内转移到细胞膜 的增加而迅速升高。 以上实验结果表明，u、．1在抑制l(562细胞生长、诱导其细胞凋亡等方面有显著功 效。其作用机制值得进一步探讨。 347