液体发酵法生产纤维素酶地研究.pdfVIP

第二届全国发酵工程学术讨论会论文集 1998 液体发酵法生产纤维索酶的研究 余晓斌 (无锡轻工大学生物工程学院无锅214036) 摘要通过对里氏木霉RutC-30摇瓶、2．5L罐分批和流加发酵产酶条件及优化的系统研究，酶活力得 到显著提高． Floc浓度 对分批发酵产酶的影响，发现菌体浓度与产酶随底物浓度增加而增加．但增加至60／L，高浓度底物对 苗体初始生长产生强烈抑制，产酶下降；通过研究不同初始SolkaFloc浓度对流加发酵产酶的影响， 发现当初始底物浓度为50g几SolkaFIOC复合109／L麸皮时，菌体量和产酶均达到最大值，分别为 IX；W15．419／L，CMCase359．7U／ml，FPA30，6U／m，高菌体量是获得纤维索酶高产的关键因素之一．此 外用硫铵盐析法对纤维素酶进行了提取． 关键词里氏木霉删Case滤纸塘酶活 纤维索酶具有』“泛的应用价值。其最大的应用领域是把纤维素类物质酶法水解成葡 萄糖，葡萄糖可用于生产燃料酒精、食品和各种化学品。此外近年来纤维索酶已开始应用 丁．众多的．J：业领域，如食品、饲料、医药、纺织、洗涤荆和造纸工业【1)等。采用液体深 层发酵法可大规模地生产纤维索酶，但发酵液酶活力不高，酶生产成本较高、价格较贵， 限制了纤维素酶在上业上的应用，因此研究液体发酵法生产纤维素酶具有现实意义。高 活力纤维素酶通常是在分批和流加发酵条件下获得的口。“]，本文对里氏木霉RutC-30 在摇瓶、2．5L罐分批与流加发酵条件下产酶进行了较为全面系统的研究，酶活力得到显 著提高，流加发酵获得了最高酶活。 l材料与方法 reesef)RutC-30 1．1菌种：里氏术霉(Tric打oderma 1．2培养基 1．2．1斜面培养基：土豆PDA斜面，30℃培养6d后使用。 Floc 1．2．2种子培养基，麸皮1％，Solkal‰蛋白胨0．3％，硫铵0．2％，酵母膏 0．03％，Tween一800．02％，121．1C灭菌 0．05％，KH2P0^0．4％。ca2c12．2H200．03％，blgS吼．71120 20min后使用。 0．03％，Tween一800．02％，消泡剂(Antifoam204Si鲫a MgSo。．7H20 Co，)适量为基础培养基， 不同浓度碳源添加后，121℃灭菌20min后使用． 1．3发酵方j岳 摇瓶发酵，采粥生理盐水斜面孢子悬液，按10％种量接种至50mi培养液中(250m1三 角瓶)．28℃旋转摇床150r／min，培养6d。 2．5升罐(KF一2．5L．KoreaFermentor Co．)发酵，将培养48hr的液体种子．按10蝌 自动控制发酵液pH为4．O：通过控制风量和转速。保持溶氧饱和度在20％。流加发酵．根 sQlka 据pH下降速度明显变慢，流加209／L Floc．分批与流加发酵过程中，发酵液pH 不再下降或回升．井伴随发酵液稠度明显降低，作为终止发酵的根据． 1．4．酶活涮定”3： I．4．1．羧甲基纤雏囊酶活(o_case)的测定 一265—— 第二届全国发酵工程学术讨论会论文集 1998 取适当稀释酶液0．5ml，加入0．5mlI％CMC溶液(溶于pH4，80．1MHAc-NaAc缓冲液)，50 ℃反应lOmin，加入3mlDNS试剂，沸水浴5min，冷却后加水稀释测糖。 1．4．2．滤纸糖酶活(即氐即酾e)涮定 称取50mgWhatmanNol滤纸，加ImlpB4．8 50℃反应lhr，加入3mlDNS试剂测糖。 以上酶活均扣除发酵液中的还原糖后计算酶活力，酶活采用国际单位，