TiO2溶胶凝胶CA125免疫传感器地研究.pdfVIP

C38 Ti02溶胶凝胶CAl25免疫传感器的研究 戴宗鞠燧先‘ (南京大学化学化工学院，南京．210093) 摘要：通过TiCh溶胶凝肢气相沉积法将CAl25抗原田定在玻碳电极表面，以邻 苯二胺作为底物，在辣根过氧化酶标记的CAl25抗体的协助下，利用竞争免疫分 析方法测定人血清中CAl25抗原的含量．该传感器制备简单，性能稳定，可缩短 分析时间，减少样品用量．实验表明该传感器在临床分析中具有应用前景． 关键词：气相沉积法，免疫传感器，CAl25。竞争免疫法 CAl25(糖类抗原125)是一种于80年代发现的癌相关抗原．属于混合型肿瘤标志物， 广泛存在于间皮细胞组织、苗勒氏管上皮及其衍生物发生的肿瘤中。因其是一种相对分子量 20万的糖蛋白，可以进入体循环。因此通过血清检测CAl25的含量，不仅在临床卵巢癌、肺 癌、胃癌、肠癌、胰腺癌、宫颈癌、乳腺癌、子宫内膜癌等恶性肿瘤的诊断中有重要意义， 而且对一些非肿瘤性浆膜腔积液(胸膜炎、腹膜炎等)患者的诊断治疗有辅助作用，以协助 腹膜癌诊断及术后监测IlJ。 免疫分析需特定仪器设各，且有放射危害，分析时间长。近年来，由于电化学免疫分析法成 功地将免疫反应的高选择性和电化学测定的高灵敏度相结合而越来越受到人们的重视。 本文利用可02溶胶凝胶良好的生物相容性。通过气相沉积法闭将CAl25标准抗原固定在 玻碳电极表面，利用竞争免疫法，以邻苯二胺为底物，示差脉冲伏安法检测HRP的催化产物。 发展了新型的CAl25免疫传感器．并成功地用于CAl25的测定。 1实验部分 1．1试剂与仪器 烷。其它所用试剂均为分析纯，实验溶液均由二次水配制。电化学测定采用三电极系统。用 BASl00B电化学分析系统(美国)进行。饱和甘汞电极为参比电极。铂电极为对电极，修饰 的玻碳电极为工作电极。CAl25检测孔板用国华蹦一2数显恒温水浴锅温育。配制含O．04％ mM BSA和1．0 7．0)作为贮存用缓冲液。 EDTA的PBS缓冲液(pH 1．2免疫传藤器的制备 玻碳电极(5 mill直径)用A1203悬浊液抛光至镜面后．氮气吹干。滴2止适量CAl25 标准抗原于电极表面，放入盛有甲基三甲氧基硅烷的锥形瓶中30X2下 气相沉积30min．形成均匀，稳定，’多孔的CAl25Ti02溶胶凝胶表面。 1．3免疫分析过程 幽一幽 图l是整个免疫分析过程：Tioz溶胶凝胶固定CAl25抗原于玻碳 ，／ 电极表面后，示差脉冲伏安法测定含适量H202和邻苯二胺的溶液，得 到空白电流。将该电极浸入含待测CAl25抗原和适量HRP标记CAl25 抗体的溶液温育40 rain，洗去吸附在电极表面的标记抗体，用示差脉冲 ’骨 伏安法测定含同样浓度H202和邻苯二胺的溶液，得到邻苯二胺在该修 饰电极上的催化电流值，进一步测出待测抗原的浓度。 图l免疫分析过程 2结果与讨论 2．1HRP对邻苯二胺的催化氧化 3．8 当溶液中只含pH B-R缓冲溶液时．在扫描范围内没有电流响应。当在该B-R缓冲溶 inM 液中加入2，5mM邻苯二胺和4．0 H2侥后，产生电流响应，但电流比较小。进一步加入 10uLl．0mgJmL的HRP后，峰电流增加，显示了HRP对邻苯二胺氧化的催化作用。 2．2实验条件的选择 实验对溶液的pH值、H202浓度、邻苯二胺浓度以及 温育时间、温育温度等实验参数进行了选择。实验表明， 在pH3．8的B-R缓冲溶液中HRP对邻苯二胺的催化活性 较在PBS缓冲溶液中大；当H202浓度大于4．0mM和邻苯 二胺的浓度大于2．5mM时．催化电流达到稳定值；实验 中在33℃下温育40rain得到最佳结果。 2．3HRP标记CAl25抗体量的选择 v11：c￡；o 将修饰好的CAl25免疫传感