I-%27--和HSA或BSA结合平衡的研究.pdfVIP

l一与HSA或BSA结合平衡的研究‘ 沈星灿 蒋治良 李芳 梁宏” (广西师范大学化学与生命学院·生物无机研究所．541004桂林) 籀婪 本文首次采用共振光散射、瑞剥光{故射和荧光光谱法并结台平衡透析i击研究了I一与 serum 人血清白蛋白(human Sert珊Albumin，简 albumin，简称HSA)或牛血清白蛋白(Bovine 称BSA)结台平衡。首扶观钡捶4I’对HSA和BSA的共振光散射有增强效应．且与加入的I一 的浓度有线性关系。而I一对HSA和BSA的荧光有淬灭效应。平衡透析结果表明，I一与HSA 或BSA结合平衡不适台用Scatchard模型处理．却能较好地符台相平衡分配规律。在不周的pH 条件下，I一的结音数随着DH的减小而增大，推测i一可能是通过静电作用与白蛋白上质子化 的碱性氨基酸残基结台的． 关●悯 血清白蛋白，碘离子，共振光散射．平衡透析．相平衡 碘作为甲状腺必不可少的成分，被称为生命元素和智力元素。缺碘可引起甲状腺肿， 克汀病，先天畸形，智力低下等许多疾病Ix]，故其生命意义受到高度重视。血清白蛋白 有着重要的载运功能，研究I一与血清白蛋自结合平衡，对了解碘的生理作用具有重要 r2，”等在1993年建立起来的共振光散射技术， 的意义，尚未见有相关报道。Pasternack 在研究生物大分子的组装和识别有灵敏的信号。我们首次用共振光散射、荧光光谱并结 合平衡透析法研究I一与HSA或BSA的结台平衡。并运用相分配原理解释了I一在白蛋 白上的结合。 1实验部分 ． 1．1主要试剂及仪器 HSA和BSA电泳纯，其它试剂为分析纯．二次去离子水。pH用HCI或NaOH溶 UV-3400型 液调节，pHs．10A型精密酸度计测量。白蛋白的浓度均用光度法lq在Hitachi 紫外一可见分光光度计上测定．荧光及共振光散射数据在RF．-450型日本岛津荧光分光光 度计上测定。透析后未被结合的碘的浓度用分光光度法PI用723型可见分光光度计测量。 1．2实验方法 平衡透析部分：透析前KI的浓度均用碘量法标定，避光透析，其它 步骤同文献l”。共振光散射部分：取待测溶液于lcm荧光比色皿中，在发射波长为 200--1000 nm的范围，测^。=^。时的发射光强度，可得共振光散射谱图。荧光光谱 nil2范围的荧光发射，得荧光光谱圈。 nm波长激发．扫描250--500 部分：以．^。=296 ·国家自然科学基金(批准号，广西青年科学基金及广西跨世纪人才基金资助． ··通讯联系^ 2结果与讨论 2．1共振光散射和荧光光谱 ．．780- 按1．2，可得到I一与白蛋白结合后的共振光散射谱图。见图1(BSA的图略)，HSA 稀溶液的共振光散射较弱-表现出5个特征峰．296rlm、470 m和710Ⅻ处有三个主 要的峰-而在500 m和930 T、Ⅲ娃有两个小肩蜂。实验发现随着l_的加入．共振光散 射强度都迅速增强。其中在296咖处的峰最为敏感，当[I一]／[HSA]120时，该处散射 增强的强度与加入的[I一]有很好的线性关系．I一与白蛋白结合后的荧光光谱见图2。 (BSA的图略)。由于I一引起的重原子效应¨]，使得HSA和BSA在350n／B左右的荧光 特征峰淬灭。我们发现I一与白蛋白结合后在296 nm处出现了瑞利散射峰增强，此处散 射往往都被忽略，其机理与共振光散射相似¨]。根据散射增强的原理…。推测是由于I一 在自蛋白表面聚集，形成了[白蛋白][I]。离子聚集物，使散射增强。