核酸-桑色素-铝离子三元体系的研究与其分析应用.pdfVIP

分析化学的成就与挑战 核酸-桑色素-铝离子三元体系的研究及其分析应用 王亚婷刘芳芳赵风林李克安 (北京大学化学学院北京100871) 关键词核酸桑色素铝离子三元体系吸光光度法 铝离子加入桑色素溶液，桑色素在350m处的吸收峰下降．419nm处吸光度增加。419nm处 吸光度的增加值与加入的核酸量在一定范围内成正比，基于此建立了在较宽范围内测定核酸的方 法并研究了反应的适宜条件。在20℃～60℃范围内温度对反应影响不大：乙醇含量增加使吸 光度降低，控制体系中乙醇含量为2％；核酸变性不影响体系的吸光度；强电解质浓度增大会降 低吸光度；试验了某些常见金属离子的影响。测定的线性范围分别为：ctDNA 0．71¨咖L～ DNA0．64 RNA 0．94 35．4¨∥mL，fs rtg／mL～25．6鹏／mL，Ygg／mL～28．4峙，mL。本方法操作 简便，试剂无毒且价廉易得。 1实验部分 mL X mL 1 00 10。3 在10mL比色管中顺次加入1．00 mol／L桑色素溶液，2．0pH=3．25的 X n1L2．42 Britton-Robinson(BR)缓冲溶液，1．0010。mol／L铝离子溶液及适量核酸溶液，水定容 至刻度。在419／1／／／波长下以试剂空白为参比澳4定溶液的吸光度。 2结果与讨论 2．1吸收光谱 nm～500 nrn、 如图l所示，在酸性条件下，核酸在320 nm范围无吸收。桑色素分别在250 300 nn2和350nm有吸收峰，其中350nm峰随AI’的加入而下降。核酸的加入使桑色素诅1“体 系的419nnl吸收峰增强。选择419rim为测定波长。 2．2反应条件的优化 2．2．1最佳酸度在pH=3左右的缓冲介质 mL 中．体系的吸光度最大且稳定。本实验中加入2．0 口H=3．25的BR缓冲溶液控制反应体系的酸度。 2．2．2桑色紊反铝离子的浓度 桑色素的浓度为1．OOxl0一mol／L，AI” nlil处 mol／L时，反应体系在419 浓度为2．4x10c5 吸光度值最大。乙醇浓度增大会降f氐吸光度，因此， 配制桑色素溶液时乙醇浓度控制在20％。可使反应 体系的乙醇含量为2％，对吸光度影响不大。 囤1吸收光谱 2．2．3反应时间和温度 1：fs DNA；2：桑色素：3桑色E-r-AI’．4：桑 min后即 室温下，核酸与二元配合物混台10 色素-Al“ctDNA 反应完全。 min厉，立即用冰水冷却。变性的核酸 2．2．4核酸变性的影响将溶液在沸水浴中加热20 对桑色素．铝体系的吸光度的增强效应不变，表明核酸大分子与桑色素．铝小分子的结合属于外围 478 ——一 坌堑些堂塑塞塾皇苎些 结合方