聚氨酯固定根霉细胞产脂肪酶地研究.pdfVIP

聚氨醋固定根霉细胞产脂肪酶的研究 尹春华 付四周 徐家立 谭天伟 (北京化工大学化学工程学院生物化工系 100029 脑要 试用多种载体固定少根根霉发醉产脂肪降，发现莱氛酣泡渗比校适合作固定化载体，发醉液醉 活比无载体直接发酵高6倍以上，而且发酵后的载体，可进一步综合利用:作固定化细地使用或连续 多批次发醉。 关桩词 少根根霉 脂肪阵 固定化 脂肪酶 (Lipase,EC.3.1.1.3)又称甘油醋水解酶，广泛应用于皮革、皮毛、绢纺、食品、医 药等行业。近些年来，随着非水相酶学研究的进展，人们发现脂肪酶在水溶液中和非水介质中 可以催化不同的反应，尤其是这些反应往往具有高度的立体选择性，可以用来制备化学方法难 以合成的手性化合物 (如光学活性药物、农药、液晶等)，从而可以大大拓展脂肪酶的可能用 途。 脂肪酶可从哺乳动物、植物和微生物中获得，微生物脂肪酶比动植物脂肪酶具有更广的作 用pH和温度范围，而且来源广，易于工业化。微生物脂肪酶中根霉脂肪酶，由于具有较好的立 体选择性，引起了人们的广泛重视[1-3j。传统的根霉发酵，菌体容易聚集成团，导致通气恶化， 产酶受阻，酶活较低]’[。采用载体固定根霉细胞发醉，发酵分为固体和液体培养两部分，可以克 服这一缺点，获得较高的发酵水平，而且载体经过简单处理后，可作为固定化细胞使用。 1 材料与方法 1.1 主要试剂 少根根霉RhizopusBuct一3457，本实验室保藏。黄豆饼粉，食品级市场购得;其它试剂为分 析纯。 1.2 主要仪器 BAKMAN高速离心机;SHA一B型水浴恒温振荡器，常州金城教学仪器厂;HYA恒温摇床，中国 科学院武汉科学仪器厂;CHRISTALPHI一4冷冻干燥仪 1.3 酶活的定义和测定方法 采用橄榄油乳化法Ls]测定脂肪酶活力。水解酶活定义;脂肪酶在37C9,pH7.0下每分钟产生 1pmol脂肪酸所消耗的醉量，即为1个脂肪酶国际单位，以U表示。 1.4 培养基 种子培养基和发酵培养基为: 黄豆饼粉3%，植物油 (橄榄油)1%,硫酸钱0.2%,硫酸镁0.1%,磷酸氢二钾0.5%, pH=7.0 1.5 实脸方法 1.5.1载体预处理 在进行固体培养前，载体经过了预处理:载体洗净，烘干，晒分，处理后各种载体的大小 一致 (直径为2mm左右)。 1.5.2 种子培养 载体预处理后，把载体加到250m1的三角锥型瓶中，载体量以覆盖瓶低3/4的面积为准。加 人少量液体培养基，使载体吸至饱和，高压水蒸汽灭菌 (0.11MPa,30分钟)。抱子悬液接人菌 种，恒温2811C9,培养2昼夜。培养期间要定时地摇晃培养载体，使长满菌丝的载体分散，不 442 致缠绕成团。 L.5.3 摇床发醉 往种子培养瓶中加人80.1左右的液体培养基，放人摇床中恒温培养，转速120r/min,温度 28土I笔。时间3昼夜 (72hr)o 2 结果与讨论 2.1 固定化载体的选择 细胞固定化方法很多，由于霉菌的菌丝或抱子与载体接触易于自然吸附，因此自然吸附以 其操作简单，成本低在霉菌固定中广泛采纳 5〔]。本文采用多孔疏松，密度和水相差不大的多 种载体吸附少根根霉细胞:按以上的实验方法 表1 细胞固定化峨体比较 进行少根根霉细胞固定化一制备发酵种子，然 Tablet comparisonofcarries加 『immobilizedcells 后转人液体发酵，得到酶液，并与根霉液体直 发醉液PH值 发醉液酶活 (./m1) 接发酵对比，测菌液酶活。表1列出了其中几 无纺布 2 5 2 5 种载体实验结果。载体发酵所得的菌液酶活与 聚醋泡沫 6 0 9 9 无载体直接发酵相比要高得多，其中聚氨醋泡 蛙石 5 5 5 7 沫，无纺布最为明显，利用载体聚氨酷泡沫作 浮石 6 2 9 为载体吸附根霉菌丝发酵所得酶活是无载体的