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壳多糖／DNA纳米材料对DNA的细胞内转移研究 ChitosanasCarriersforinvitroDNAPlasmid Cells to Delivery 昧江字张峻蜂‘裹淑英徐零荣丁智 (南京大学医药生物技术豳家茧点实验室，江苏南京210093) 体．天然壳多糖分予量大，陶此戢溶，限制了窀作为基因输送载体在体内的应用．我们用化学降解法， 得到了分子重较小的降解壳多糖，增大了壳多耱的溶解发．青质粒PsV一4扣口一Gal的结奋实赣表明了壳 多楗等§默夷好池鳍合簸力静稳定性辘。我供惩壳多糖／DNA复合体转荣Hela握箍，证绣亮多糖跑其他 的非病毒载体转染效率藏．为了进一步提舞药物和DHA对于野胜细胞的靶囱悭，我们砖低分子囊竟多 糖进行了乳糖酸修饰，因为肝脏细胞存在乳糖醺半乳糖残基的受体ASGR．用半乳糖基修饰壳多糖作为 戴体，利用ASGP．受体介导的细胞内吞作用，可增强aN^对于靶细胞肝脏细胞的导向性，并且能建长DN^ 在细施串翦有效作蔫对弼． ． 关曩漏悫多糖多聚浆离子非癀毒戴体D隧霞粒细胞蠹转移 随着人类基因缎计划的实施，一大批与疾病相关的新基因被相继发现，人们对一嫂疾病在基因水 平上有了更深入的了解。并希望通过基因治疗，即通过替换有歃陷的基因或调节致病纂因的表达，来 治愈一系剜重大疾瘸，鲡癌瘢，艾滋瘸和心盘篱疾病等辨≈。而纂园疗法簧惩岛传统疗法一样成兔稿床 常规治疗手段，必鬟发震一秘安全有效的蘩因辘送体系，能够将DNA分予导入特定的妻畦脆中，弗能稳 定地维持其功能。 目前，主要有兰类基因输送体系：(1)物理转染法：(2)重组病毒载体输送体系：(3)非病毒载 体输送体系p“l。用物理法，如电穿孔法导入DNA的细胞成活率过低。煎组病毒载体将DNA分子导 入细熊盼转移彀率虽然商，餐它其有DNA包装容薰有蹶和安垒靛方瑟的闷蘧(如免痉漾性、潜在的感 染性等)，制约了北方法蛇广泛应用。l}病毒载体能与DNA分子形戏复会体，剥鲻细瓤豹内辱作用将 复合物导入细胞内。阍时，形成的复合物也可减少体内酶对DNA分子的降解。由予这种方法安垒可靠， 并且可能用化学方法对载体进行分子设计。因此，近年来非病毒基因输送载体引起人们广泛的兴趣。 在众多的j#病毒基因输送载体中，壳多糖(chitosa．)由于箕优良的性能，醴受到越来越多的关注。 壳多糖是出尼丁葳脱乙蘸丽产生静天然多耱，铝由N．乙蔬麓耱胺帮薷糖胺单体遥遗p．1。4糖苷键连接 嚣成。对竟多糖磷变表明，巍多赣具蠢较好的生物相寥性，低的缨胞毒性寝免疫骧性，苓会造成溶照 反应。重要的是，壳多糖是一嵇天然多聚阳离予。宅能与带负电荷的DNA结合著且结合比例高，同时 保护DNA免受DNA酶的降解【5“】。此外，我们可通过化学方法，利用壳多糖中的活性基嗣，如自由 氨基对它进行化学修饰，提高壳多糖肿NA粒子对细胞的特异性输送F。‘母j。 本论文串，我嚣j在编胞承平上研究壳多糖作为载体瓣蹦A静鲴脆癌转移。眈较了尧多糖帮箕链的 j}褒毒载髂对细胞的转絷效攀。对低分子爨壳多糖进霉亍了gk糖酸修馋，剃飓ASGR受体余导的细腿内嚣 作用，研究DNA对于肝脏细胞的靶向导向性。 {实验部分 I．t仅器帮试帮 C02孵箱，型号为ESPEC 胞所细胞库。 1 2实验方法 NaCI，17．5 DNA I．2．i壳多糖一DNA溶液的制备．双蒸水12pl，17．2mM pl，40mM氯喹3．5pl，20pg／ml 2pl，0．02％未降解的壳多糖35pi，混匀，37℃孵箱放暨3分钟。 1 DNA 2．2磷酸钙一DNA共沉淀物制各．双蒸水223pi，20ug／ml 2pl，2．5枷CaCl。25p1。 DNA2