真养产碱杆菌发酵生产聚β—羟基丁酸（ＰＨＢ）地研究.pdfVIP

真养产碱杆菌发酵生产聚∥一羟基丁酸(P隅)的研究 杨明李红旗赵焕铸章银良沈忠耀 00084) (清华大学化工系北京1 ii 抽姜本文对真养产碱杆菌(A／caligcnoseutrophus)NCIMB599在10L发酵罐中利用 葡萄糖作为唯一碳承发酵生产聚芦一羟基丁酸《PHB)的发酵过程进行了研究．在咀葡萄糖为唯一 碳器的发酵中，分别在缺氧情况下，限氧情况下．限磷情况下厦限磷扫缺氧情况下对茼体生长厦 PIIB积累规律进行了研究．实验表明，氧和磷在茵体生长厦PHB的积】I【过程中起着重要作用．缺 氧不利于茵体生长度积累PHB；在一定程度上睢制溶解氧则可促进PHB的积累；在供氧充足时． 限磷有利于PHB大量积累：而限磷和缺氧条件下则抑制茵体生长和PHi]积累．采用限磷法发酵生 产PHB，经72．5h后得到菌体细胞干重为138．29／L，PHB含量为111789／L，PHB占细胞干重80．9x． 关t词真养产碱杆茸 聚芦一羟基丁酸发酵限氟限磷 1引言 聚卢羟基丁酸酯(PHB)是微生物在不平衡生长条件下作为储能物质而贮存于细胞内的一种 年从细胞中分离出来。PHB不仅具有与化学合成塑料(如聚丙烯)相似的性质，而且还具有化 学合成塑料所没有的特殊性能，如生物降解性，生物相容性，光学活性以及可利用再生资源进 行生物合成等”“。近十年来，随着化学合成塑料对环境造成日趋严重的“白色污染”，可生物 降解材料的研究受到人们的广泛重视。人们期待一种新型可生物降解塑料替代现有的石化合成 材料。其中，聚卢羟基丁酸(PHB)最为引人注目。英国ICI公司经过15年努力，率先于1990 年采用真养产碱杆菌(Alcaligenes 塑料并继续对其进行研究开发。目前，其生产规模已达年产1000t左右的水平并计划扩大生产规 模■ 目前PHB大规模工业生产的最大障碍是成本较高。造成PHB生产成本高的主要原因是原 (2)利用 料成本和回收成本高，因此可以通过(1)开发优良的菌种以提高PHB产量和产率： (4)开发合适的提取工艺来降低成本。本文利 价廉的原料； (3)优化发酵生产PHB的过程； 用10L发酵罐．以真养产碱杆菌为菌种，研究了在以葡萄糖为唯一碳源时各种条件下PHB合成 的规律，以期望通过高密度发酵生产PHB进一步降低PHB的生产成本。 1方法与材料 1．1菌株 11599 eutrophus)NCIMB 真养产碱杆菌(Alcaligenes 1．2分析方法 菌体浓度(DCW)测定．采用细胞干重称量法；PHB含量测定，采用浓H：so,降解法”1： 葡萄糖含量测定，采用3,5一二硝基水杨酸法…；磷酸盐含量测定，采用钼蓝比色法…。：(NH。hso． 含量测定，采用靛定酚蓝比色法”’。 2结果与讨论 2．1缺氧条件对发酵合成PHB的影响 真养产碱杆菌属革兰氏阴性好氧杆菌，溶氧对该菌体的生长具有非常重要的作用。发酵中 采用较低的搅拌速度(低于300rlmin)，低通气量，使发酵液处于溶解氧很低的状态下进行菌 体培养。实验表明，接种后菌体生长比较缓慢。进入菌体生长阶段，由于溶解氧一直保持在很 低的水平(D．O10％)，菌体生长受到很大影响，因此发酵液始终比较澄清，并发现有菌体结 团沉积于发酵罐底部的现象。同时，发酵液产生剌鼻的酸味，且葡萄糖消耗及菌体生长均十分 缓慢。采用低溶解氧培养，菌体发酵后期菌体干重仅为3．69几，PHB浓度为L339／L，占菌体干 重37％。 PHB EⅧ acid —+ —+TCACirclc Glucose-*—}Pyruvic_Acety；-CoA—}