细菌木聚糖酶产生菌的改良和产酶条件研究.pdfVIP

第二届全国发酵工程学术讨论会论文集 1999 细菌木聚糖酶产生菌的改良及产酶条件研究 白云玲许正宏孙微陶文沂 (无铝轻工大学生物工程学院无锝214036) 摘要以实验室保藏的产木聚糖酶细菌XY00I为出发蔼株，经IJv，NTG诱变处理．成功筛选得 到～株高产突变株XUN024，产酶水平比XY001提高一倍多．同时初步研究了XUN024的产酶条件． 关键词木聚糖酶诱变发酵条件 术聚糖是自然界中半纤维素的主要组成成分，木聚糖酶(E．C．3．2．1．8)是一类能特异 降解木聚糖的酶类．近年来由于其在造纸工业、食品工业以及饲料等工业中的广泛应用 而受到幂斗研工作者的普遍关注。文献表明cJJ，术聚糖酶能由很多微生物所产生．国外的研 究涉及细菌、霉菌、酵母等多种微生物，并已有用于造纸工业、淀粉加工业等方面的工 业用酶．国内木聚糖酶的研究主要集中在霉菌木聚糖酶方面p‘。”，有关细菌木聚糖酶的 研究较少。本研究以实验室保藏的一株产木聚糖酶的细菌XY001为起始材料。通过物理、 化学等手段诱变改良，获得一株高活力突变株XNTG．024，并对其酶合成机制及产酶条件 进行了初步研究。 1材料与方法 l 1 菌株 本研究室保藏产木聚糖酶细菌XY001 1．2 培养基 NaCl0．5 l 10C 1．2．1种子培养基(％)：葡萄糖l蛋白胨0．5 lSmin O．1 O．05NaC|O．05 1．2．2选择培养基C％)：半纤维素1KN03MgS040．05K2HP04 pH9．O 121℃20mln 1．2_3摇瓶筛选培养基(％)：麸皮4蛋白胨0．5 8．5 121℃ K2HPO,0．0SpH 20min 1．2．4产酶条件实验培养基(％)：半纤维素l蛋白胨4K2HP044pH8．5121℃15rain 1，3 半纤维素的制备：据文献…略有改动 收集沉淀，95％7--,醇洗涤两次，50—60℃烘干。 1．4 VV、NTfi诱变及突变株筛选：接文献m’。1方法 1．5 木聚糖酶的测定方法n 发酵液经离心得到粗酶液，用pt17．6。0．04moUL巴比妥钠缓冲液稀释适当的倍数．取稀 娟焉酉了i{F聂美丽F一 277— 第二届全国发酵工程学术讨沧会论文集 l 998 活单位定义为上述条件下，每分钟释放l“too!木糖的酶量。 2 结果与讨论 2．1 XY001的诱变结果 按方法1．4进行产酶菌株的改良与选育，uV处理时间为60s，该剂量的致死率约为80％。 通过选择平板粗筛出68株进行摇瓶复筛．其中15、39号突变株的产酶水平有较大提高，提 15。 高幅度分别达到49．7％和26．3％．15号菌酶活可达2501U／ml，命名为XUV0 明XUV 015经过UV诱变后再经brig诱变，大部分诱变株的酶活提高幅度不大，但却筛到 一株酶活高达3541Ulml的突变株24号，命名为XUN024。 2．2 XUN024的产酶条件 2．2．1碳源的影响 2．2．I．I不同碳源对产酶的影响 在产酶条件实验培养基中分别添加1％浓度的不同碳源，进行产酶实验，结果如表l 表1不同碳源对产酶的影响 由上表可见．该菌在不同的碳源条件下，产酶能力完全不同。在以葡萄糖、蔗糖、淀粉 等容易利用的物质作为碳源时，该菌几乎不产木聚糖酶，但菌体生长良好。在以含木糖苷类 物质的木聚糖、麸皮、自制半纤维素(主要成分为木聚糖)等作为碳源时，该菌能够大量产 生木聚糖酶．这一结果与以往的报道类似。由此我们可以推测该菌产木聚糖酶为诱导型，木 聚