稳定表达E-cadherin基因Es细胞向肝脏组织结构诱导分化体外实验研究.pdfVIP

◎@⑦ 稳定表达E-cadherin基因的ES细胞向 肝脏组织结构诱导分化的体外实验研究 胡安斌，何晓顺，黄冰，朱晓峰，马毅，王东乎， 王国栋，邰强，巫林伟，鞠l!强，黄洁夫 中山大学附属第一医院器官移植科 【摘要】 研究背景和甘的：目前，ES细胞向肝细胞诱导分化已取得较大进展，但仍停留在单细胞水平而 无法组织化。细胞黏附被认为是胚胎发育和组织形成的原始基本机制，而在体内胚胎早期肝脏组 织等上皮组织发育中，其细胞黏附是由上皮型钙粘蛋白 察其在体外向肝系细胞分化并使其组织化的能力，并为继续深入研究ES细胞体外向组织结构分化 进而移植应用提供理论基础和技术指导。 原支架颗粒制成的三维培养系统中，换用EBs培养液进行下一步诱导培养。对三维培养系统中的 的标记物的动态表达。整个过程中，观察分化细胞黏附能力和形态结构变化，最后在形成多层黏 附生长的细胞团块后，利用免疫细胞(组织)化学、FCM、共聚焦立体显微镜、免疫电镜以及荧光 能；肝细胞排列状态以及与BE细胞和类胆管结构的形态关系；细胞联接的超微结构、细胞骨架蛋 白丝连接和排列特点：肝细胞和BE细胞的单向排泌功能等。综合判定是否达到肝脏组织化标准。 通ES细胞分化后，由致密的拟胚体(EB)结构逐渐分化为分散的细胞群落并失去组织结构形 态，而基因转染的ES细胞分化后，细胞黏附能力明显增强，至19天时仍能保持致密的细胞黏附连 接和多层细胞生长状态；4．将三维生长的细胞团块进行观察和检测，发现：各种肝细胞和BE细胞 标记物均在其内表达；出现典型形态的类肝细胞、BE细胞以及后者组成的类胆管结构，类肝细胞 焦显微镜发现细胞极化现象明显，免疫电镜显示该细胞团之间具有典型的肝细胞间联接以及肝细 胞和BE细胞间联接形态；荧光素排泌实验发现类胆管结构内具有单向排泌现象。 化，分化15天开始形成三维多层的细胞团块，这些细胞团块由肝细胞和BE细胞组成，并观察到类 胆管结构形成，经过免疫组化和骨架蛋白染色以及共聚焦显微镜和免疫电镜观察，这些肝细胞和 BE细胞形成了以类胆管结构为中心的类肝脏组织结构；3．本研究为下一步继续深入诱导Es细胞体 外向功能良好的肝脏组织结构分化并移植应用提供了良好的前期实验基础。