单克隆抗体探测蛋白质折叠机制微量热研究.pdfVIP

单克隆抗体探测蛋白质折叠机制的微量热研究‘ 梁毅 秦志杰 陈杰 周筠梅 静国忠 (中国科学院生物物理研究所，生=物大分子国家重点实验室、北京lOOiO!) 蛋白质的功能是怎样被赋予的呢?这是蛋白质折叠研究要解答的首要问题．近年来的研究 表明，伸展的肽链经过早期折叠进入中间志(如前熔球态、熔球态等)，然后由中间态过渡到最终 的具有特定三维结构和生物功能的天然态【”．1988年，郜承鲁院士在总结前人实验结果的基础 上，提出了关于蛋白质折叠的新生肽链折叠假说{2】：蛋白质折叠在生物合成的早期印已开始，其 构象随肽链伸长不断调整直至形成完整的功能蛋白．单克隆抗体作为一种特殊蛋白质和新型分 子探针，由于能够高效、专一地识别抗原表面具特殊性质的区域(称为抗原决定蔟)’因此正逐 步成为蛋白质折叠机制研究的有用工具口1． 微量热注是近年寒发晨起来的一种研究生物热化学与生化过程动力学的重要方法，它通过高 灵敏度、高自动化的微量量热仪原位、在线、不干扰、连续和准确地监测和记录一个变化过程 的量热曲线，同时提供熟力学和动力学信息．该法特别适应于研究生命系统中的各种特异过程(如 酶促反应、抗体一抗原相互作用等)141．用微量热法测定抗体一抗原相互作用的特征热力学参数是 近年来国际上关注的研究课题I”】，但用单抗探针灵敏地监剥蛋自质折叠机制的微量热研究尚未 PO及其N一末端肽段的 型间歇与微量滴定微量热仪直接测定了抗金黄色葡萄球菌核酸酶(SNase 单克隆抗体McAb2C9与奎酶及不同长度肽段相互作用的表观摩尔结合培．实验结果见图1． 由图1可见，McAb2C9与核酸晦及其N一末端片段相互作用的表观摩尔结合焓有较大的差 定簇的特定区域在核酸酶折叠的早期即已出现．但随着肽链的鲑续延伸．较长片段(SNRll0， 培仅为较短片段相应值的约60％。这是由于-5 7％J，结构鞍为紧密，符合前熔璋杰的结构特性，而 结构百分率由前者的6．5％陡井至后者的17 在这些较长片段中抗原决定簇被部分包埋或屏蔽，导致抗体不易接近．当整条肽链的合成完成 后，SNase McAb2C9的结合能力表现为最低，其表观摩尔结各培仅为较短片段相应值的约 R-5 45％，这表明肽链上作为抗原央定蔟的特定区域在核酸雌折叠完戚后，已较少暴露在该酶的表面， 同时也说明在由粪天然态SNRl41延伸到天然态SNaseR的过程中，肽段构象仍有较为明显的 变化。上述结果充分说明核酸酶在肽链延伸直至形成完整的功能蛋白的过程中经历了多次构象 调整。微量热实验的结果同时表胡，McAb2C9的抗原决定簇是SNaseR肽链上52位残基前的 菜段(或其几段)巯水侧链． 学基金和中国科学院王宽诚博士后工作奖励基金资助项目． 综土所述，本文运用微量热法灵敏监测了不同长度肽段与特定单克隆抗体结合能力的变化， 从一个侧面观察到了肽链的鲐构在其延伸的过程中不断调整的现象，从而为郐氏新生肽链折叠 假说提供了新的实验证据，同时为蛋白质折叠机制探索了一条新的研究途径． 舍 { 王 、_名 对 才 acid Numberofaminoresidues McAb2C9相互作用的表观摩尔结合蛤 图】SNaseR及其N一末端片段-5 量热实验均在298．15K下，pH=7．4的磷酸盐缓冲溶液中进行 210． 4】“M，【SNR]D，【McAb2C9]o fMcAb2C9]o=1 参考文献 1 冯佑民，生物的化学，1995，15(2)：4-7． 2 809·1812 C．L 988，27：I